破骨細胞性骨吸収機構の解明:破骨細胞機能と細胞骨格

阐明破骨细胞骨吸收机制：破骨细胞功能和细胞骨架

• 批准号: 04671113
• 负责人: 金久 純也
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671113/
• 关键词: 破骨細胞; Fluorescence Redistribution After Photobleaching(FRAP); 共焦点レーザースキャニング; 膜物質; 膜内側方拡散; 動態解析; 膜脂質; グリコプロテイン; ポドゾーム; 細胞骨格; 封鎖帯; 骨吸収

破骨細胞(OC)の膜物質の動態を明らかにするために、新生家兎長管骨より分離したOCを用いてFRAP(Fluorescenc Redistribution After Photobleaching)により膜脂質および膜タンパクの側方拡散速度を解析すると共に、細胞内へ移行した膜物質の局在を共焦点レーザースキャニングで3次元的に画像解析した。1 FRAP<膜脂質>PBSで洗浄したOCに20mug/mlのNBD-phosphatidyl-choline(NBD-PC)を加えて、室温で20分間負荷した後、ACAS-570レーザー・サイトメーターを用いて細胞上の蛍光分布を2次元画像解析した。そして画像上の蛍光陽性部分の微小領域を、レーザーパルスを照射して、photobleachし、その直後から同領域の蛍光回復を経時的に測定し、周囲からのNBD-PCの拡散速度を解析した。<グリコプロテイン>4℃のPBS中でOCを80mug/mlのFITC-Wheat Germ Agglutinin(WGA)で30分間標識した後、PCの場合と同様にWGA結合性グリコプロテイン(WGA-GP)の側方拡散速度を解析した。2 共焦点レーザースキャニングNBD-PCあるいはFITC-WGAと反応させたOCを37℃の培地中でインキュベートし、経時的に蛍光物質の局在を調べた。NBD-PCによりOC全体に陽性蛍光を認めたが、細胞辺縁部に比べ中央部がより強い蛍光を示した。NBD-PCの側方拡散速度(D)は4.9±1.0×10^<-9>〓/sec(以下mean±SEM)、photo-bleaching後の蛍光回復率(R)は37.7±4.5%であった。NBD-PCの蛍光は室温および37℃で経時的に細い蛍光が認められた。WGA-GPのDはPCより10〜100倍遅く、細胞辺縁部では2.3±0.8×10^<-10>〓/sec、Rは38.1±4.4%、中央部でのDは3.9±1.2×10^<-10>〓/sec、Rは34.7±5.8%であった。なお、OC上のWGA-GPは、37℃で経時的に1〜数カ所に凝集し核周囲領域へ集積した。OCのNBD-PC,WGA-GPの側方拡散は他種の細胞のそれとよく類似した傾向を示したが、測定値のバラツキを大きく、個々のOCの活性状態が多様であることが示唆された。

Dynamics of <s:1> membrane material <e:1> of osteoclasts (OC) を bright ら にするために にするために separation of <s:1> たOC from long tubular bone of newborn rabbits よ <s:1> isolation of <s:1> た oc を using <s:1> てFRAP(Fluorescenc Redistribution After Photobleaching) に よ り membrane lipid お よ び membrane タ ン パ ク の side company, spread speed を parsing す る と へ に, cell migration し た membrane material の bureau in を focus レ ー ザ ー ス キ ャ ニ ン グ で 3rd dimensional analytical し に portrait た. 1 FRAP < membrane lipid > PBS で し at た OC に 20 keller/ml の NBD - phosphatidyl choline - (NBD - PC) を え て, room temperature で 20 points between load し た and ACAS - 570 after レ ー ザ ー · サ イ ト メ ー タ ー を with い て cells の 蛍 portrait を 2 dimensional analytic し light distribution Youdaoplaceholder0. そ し て in this portrait の を 蛍 positive part の tiny light field, レ ー ザ ー パ ル ス を irradiation し て, photobleach し, そ の straight after か ら with field の 蛍 light reply を 経 に determination of し, zhou 囲 か ら の の NBD - PC company, spread speed を parsing し た. < グ リ コ プ ロ テ イ ン > 4 ℃ の で OC in PBS を keller 80 / ml の FITC - Wheat Germ Agglutinin (WGA) mark で 30 points between し た, PC と の occasions with others after に WGA associativity グ リ コ プ ロ テ イ ン (WGA - GP) の side company, spread speed を parsing し た. 2 total focus レ ー ザ ー ス キ ャ ニ ン グ NBD - PC あ る い は FITC - WGA と anti 応 さ せ た OC を 37 ℃ の in petty で イ ン キ ュ ベ ー ト し and 経 に 蛍 material の bureau in を light tones べ た. NBD - PC に よ り OC all positive に 蛍 light を recognize め た が, cell 辺 に try department than the central part べ が よ り strong い 蛍 light を shown し た. NBD - PC の side company, spread speed (D) 4.9 + / - 1.0 * 10 ^ は < 9 > 〓 / SEC (mean + SEM), the photo - after bleaching の 蛍 light response rates (R) 37.7 + / - 4.5% は で あ っ た. NBD-PC <s:1> 蛍 light および room temperature および37℃で time-honored に fine 蛍 蛍 light が recognition められた. WGA - GP の D は PC よ り 10 ~ 100 times 遅 く, cell 辺 try department で は 2.3 + / - 0.8 * 10 ^ < - > 10 〓 / SEC, R は 38.1 + / - 4.4%, the central department で の D は 3.9 + / - 1.2 * 10 ^ < - > 10 〓 / SEC, R は 34.7 + / - 5.8% で あ っ た. Youdaoplaceholder0, <s:1> WGA-GP へ at OC, and に1 ~ number カ of カ at 37℃で time に the に condensed <s:1> perinuclear 囲 domain へ accumulated た た. OC の NBD - PC, WGA - GP の side company, scattered は he の cells の そ れ と よ く similar し た tendency を shown し た が, determination of numerical の バ ラ ツ キ を big き く, a 々 の OC の active が others more で あ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

金久純也: "Bone Science講座第2巻第8章" 廣川書店,(1994年3月発刊予定), (1994)

金久纯也：《骨科学教程第2卷第8章》广川书店（预定1994年3月出版）（1994年）

金久純也: "歯槽骨吸収のメカニズム" 歯界月報. 10. 1-8 (1992)

Junya Kanehisa：“牙槽骨吸收的机制”《牙科月报》10. 1-8 (1992)。

金久 純也: "歯槽骨吸収のメカニズム" 歯界月報. 10. 1-8 (1992)

Junya Kanehisa：“牙槽骨吸收的机制”《牙科月报》10. 1-8 (1992)。

金久 純也: "Bone Science講座.第2巻,第8章" 廣川書店, (1993)

Junya Kanehisa：“骨科学教程。第 2 卷，第 8 章”广川书店，（1993 年）