興奮性アミノ酸レセプターの単離精製に関する研究

兴奋性氨基酸受体的分离纯化研究

• 批准号: 04671421
• 负责人: 荻田 喜代一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Setsunan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671421/
• 关键词: 興奮性アミノ酸レセプター; N-メチル-D-アスパラギン酸; AMPA; カイニン酸; [^3H]グルタミン酸結合; グルタミン酸結合蛋白質; 可溶化; 精製

ラット脳のN-メチル-D-アスパラギン酸(NMDA)レセプター複合体の可溶化および精製を[^3H]グルタミン酸(Glu)結合を指標として試みた。脳膜標品を1%デオキシコール酸(DOC)で可溶化した。本実験条件下の可溶化標品中には、NMDAアゴニスト、グリシン(Gly)およびポリアミンに感受性を持つ[^3H](+)-5-methyl-10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5,10-imine(MK-801)結合部位が存在した。さらに、本標品中のNMDA感受性[^3H]Glu結合および[^3H]Gly結合を測定したところ、ともに蛋白質量依存性の特異的結合が検出された。[^3H]Glu結合に対するアゴニストの効果を検討したところ、NMDA、DL-α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid(AMPA)およびカイニン酸(KA)はいずれも濃度依存的に結合を阻害したが、10^<-4>MのNMDA、AMPAあるいはKAの添加時でもそれぞれ40.8±3.7%、58.2±3.7、51.9±4.8の結合が残存していた。NMDA(10^<-4>M)存在下の結合は、Glu、AMPAおよびKAにより完全に阻害されたが、NMDAアンタゴニストの(±)-3-(2-carboxypiperazin-4-yl)propyl-1-phosphonate(CPP)およびD-2-amino-5-phosphonovalerate(D-AP5)では阻害されなかった。一方、AMPA(10^<-4>M)あるいはKA(10^<-4>M)存在下の結合は、いずれもGlu、NMDA、CPPおよびD-AP5より阻害されたまた、AMPAあるいはKA存在下の結合はそれぞれKAおよびAMPAでは著変を受けなかった。次に、DEAE-Toyopearl 650Mカラムクロマトグラフィを行ったところ、0.05、0.1、0.2、0.3および0.5M KClのすべての溶出画分に[^3H]Glu結合が検出され、それぞれ画分I、II、III、IVおよびVとした。画分1の結合はNMDA、AMPAあるいはKAのいずれの添加でも阻害されず、QAでのみ阻害された。一方、画分II〜Vの結合はすべてのアゴニストにより阻害された。その中で画分IIはNMDAによる阻害が比較的微弱であるのに対して、画分III〜VではNMDAによる阻害成分の割合が比較的高いことが判明した。

In this study, N-thiocyanate-D-thiazolinic acid (NMDA) was used in combination with Glu (soluble thiocyanate) complex. 1% of the film label is soluble in acid (DOC). Under the condition of this solvent, there is a sensitive compound at the binding site of dibenzo [NMDA] cyclohepten-5,10-imine (MK-801) at the binding site of [^ 3H] (+)-5-methylmethylene (+)-5-methylmethylidene (+)-5-methylmethylene (+)-5-methylmethylidene (+)-5-methylmethylene (+)-5-methylmethylethine (+)-5-methylmethylene (+)-5-methylmethylene (+)-5-methylmethyleth In this standard, NMDA sensitivity [^ 3H] Glu combined with [^ 3H] Gly was used to determine the sensitivity of protein and protein in this standard. [^ 3H] the combination of Glu and KA is highly effective. The results show that there are significant differences between the two groups, NMDA, DL- α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid (AMPA), KA, 10 ^ & lt;-4&gt M

项目成果

荻田 喜代一: "NMDA脳室内投与による転写制御因子のDNA結合能の変動" 神経化学. 31. 170-171 (1992)

Kiyoichi Ogita：“脑室内施用 NMDA 改变转录调节因子的 DNA 结合能力”《神经化学》31. 170-171 (1992)。

荻田 喜代一: "転写制御因子AP-1のDNA結合能" 神経化学. 31. 436-437 (1992)

Kiyokazu Ogita：“转录调节因子 AP-1 的 DNA 结合能力”《神经化学》31. 436-437 (1992)。

Kiyokazu Ogita: "Inhibition of calmodulin antagonists of [^3H]MK-801 binding in brain synaptic membranes" J.Neurochem.59. 1008-1016 (1992)

Kiyokazu Ogita：“[^3H]MK-801 钙调蛋白拮抗剂在脑突触膜中结合的抑制”J.Neurochem.59。