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初代培養肝細胞における分化機能発現の細胞密度依存性の分子機構

原代培养肝细胞分化功能表达细胞密度依赖性的分子机制

基本信息

批准号：
04680198
负责人：
野田千征子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

成熟肝細胞は細胞周期のGO期にあり、増殖を停止しているが、部分肝切除後肝細胞は活発に増殖し、肝再生行なう。肝細胞を初代培養すると細胞密度が低いほど増殖活性は高いという細胞密度依存性が観察される。この細胞密度依存性の分子機構を解明することを目的として研究を行なった。肝細胞の増殖はインスリンとEGFの刺激によっておこる。しかし、インスリンレセプターの数、親和性は細胞密度によって影響を受けなかった。EGFレセプターは細胞密度が低いとむしろ高親和性型から低親和性型に移行することが観察され、増殖活性の細胞密度依存性調節は少なくともレセプターレベルではないと思われる。次に、細胞密度による細胞内蛋白質のリン酸化の相違を調べた。細胞を^<32>Pでラベルし、細胞可溶性画分と細胞骨格とに分離し、2次元電気泳動を行なった。細胞骨格蛋白質の中で細胞密度の低い培養条件でのみ特異的にリン酸化されるスポットを見い出した。現在、その蛋白質を同定しようと試みている。肝細胞がG0期からG1期に移行する際に起こる遺伝子発現の違いを調べることによって、G0期とG1期の調節に関わる遺伝子を単離するために、以下の戦略で実験を行なっている。高密度培養細胞と低密度培養細胞からRNAを調整し、それぞれのdiferential cDNA libraryを作成した。現在いくつかのクローンのDNA配列を決定しつつある。肝臓に特異的に発現しているセリン脱水酵素は肝細胞が増殖する際にはその発現が抑制される。この遺伝子は生後肝臓に発現してくるが、胎仔肝細胞では転写抑制因子によって発現が制御されていることが判明した。低細胞密度培養におけるセリン脱水酵素遺伝子の発現抑制にも同様な制御機構が作動しているのかを検討中である。

After partial hepatectomy, the cell cycle of mature liver, the cycle of go phase, the cell cycle of mature liver, the cell cycle of go phase, the cessation of colonization, partial hepatectomy and liver regeneration. The primary culture of liver cells was characterized by low cell density, low cell density, high cell density dependence, low cell density, high cell density dependence, low cell density and high cell density dependence. The molecular mechanism of cell density dependence has been explained by the molecular institution for the purpose of conducting research. The cells of the liver were proliferated and stimulated by EGF. The number of cells, the number of cells, the density of cells, the number of cells, and the density of cells. EGF cell density is low, cell density is low, sex type is high, sex type is low, and sex type is migration. Cell density dependence is small. Cell density, intracellular protein, acidification, cell density, cell density, intracellular protein, acidification, cell density, cell density, intracellular protein, acidification, cell density, cell density, intracellular protein, intracellular protein, acidified protein, acidified protein, intracellular protein, intracellular protein, Cell cycle ^ & lt;32>P cell dissolubility painting cell bone cell separation, two metamorphic swimming cycles. Low cell density, low cell density, special acidification, low cell density, low cell density and special conditions. At present, the protein content is the same as that of the protein. The liver cells in G0