肝臓の最終分化と増殖を相反的に制御する因子の解明

阐明相互控制肝脏终末分化和增殖的因素

• 批准号: 02670111
• 负责人: 野田 千征子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670111/
• 关键词: 肝臓; 肝細胞; 分化; 遺伝子発現; 転写因子; セリン脱水酵素; 細胞増殖; 癌化

肝細胞の最終分化の分子機構を解析するための第一段階として、セリンデヒドラタ-ゼ(SDH)遺伝子の転写調節因子、SDHの5'上流、-759/-249と-252/+123をプロ-ブとし、胎仔肝と成熟肝の核抽出液を用いて、DNaseIフットプリントを解析した。その結果、1。-595/-565(site A),-102/-56(site B)に結合する因子の存在が胎仔肝と成熟肝核抽出液に認められた。2.それ以外に、-10/+2(site C)に結合する因子が、胎仔肝に特異的に存在することが判明した。Site A,BおよびCの塩基配列には、既知の数種の肝特異的転写因子の中で、結合する可能性があるのは、HNFー2様因子のみであり、このことは、site A,BおよびCに未知の因子が結合していることが予想される。特に、胎仔肝に特異的なsite Cについては、SDH遺伝子の転写抑制に作用する因子が結合している可能性が示唆された。また、site Bについては、フットプリントパタ-ンにおいて、胎仔と成熟肝に相違が認められたので、このsiteに異なる因子が結合することも予想された。現在、site A,B,およびCの配列を含むオリゴヌクレオチドを用いて、結合の競合実験ならびにゲルシフトアッセイを行い、解析を進めている。次に、分化機能を維持しているとされている肝癌細胞(H4IIE,Hep G2)のSDHの発現を酵素活性とmRNAレベルで調べた。これらの細胞では、全くSDHを発現していないことが明かとなった。さらに、SDH遺伝子の5'上流約2kbの下流にchloramphenicol acetyltransferase遺伝子連結した融合遺伝子をこれらの細胞に導入し、CAT assayを行った。CATの発現はみとめられなかった。このことは、初代培養肝細胞では、SDHーCAT遺伝子が発現されることと対比される。このような肝癌細胞におけるSDH遺伝子の発現のOFFは胎仔肝と同様の機構によるのか、という点についても併せて解析する予定である。

Liver cells の eventually の molecular institutions を parsing す る た め の first Duan Jie と し て, セ リ ン デ ヒ ド ラ タ - ゼ (SDH) heritage 伝 son の planning write adjustment factor, SDH の 5 'upstream, と - 759 / - 249-252 / + 123 を プ ロ - ブ と し, fetal liver と mature larvae の nuclear extract を with い て, DNaseI フ ッ ト プ リ ン Youdaoplaceholder0 parses た. Youdaoplaceholder0 そ result, 1. - 595 / - 565 (site), - / 102-56 (site B) に す る factors の が fetal liver と mature larvae liver nuclear extract に recognize め ら れ た. 2. そ れ に, 10 / + 2 C (site) に す る factor が, fetal liver に exist specific に す る こ と が.at し た. Site A, B, お よ び C の salt base with column に は, both known の several の liver specific planning write factor の combines で す る possibility が あ る の は, 2 others factor の HNF ー み で あ り, こ の こ と は, Site A, B お よ び C に の unknown factor が combining し て い る こ と が to think さ れ る. Special に, fetal liver に specific な site C に つ い て は, SDH survived 伝 の planning write inhibit に す る factor が combining し て い が る possibility in stopping さ れ た. ま た, site B に つ い て は, フ ッ ト プ リ ン ト パ タ - ン に お い て, tire seed と mature liver に が deemed to recognize め ら れ た の で, こ の site に different な る factor が combining す る こ と も to think さ れ た. Now, the site A, B, お よ び C の match column を containing む オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を with い て, combining の competition be 験 な ら び に ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ を い, parsing を into め て い る. に, differentiation function を maintain し て い る と さ れ て い る liver cancer cells (H4IIE, Hep G2) の SDH の 発 を enzyme activity now と mRNA レ ベ ル で adjustable べ た. <s:1> れら <s:1> cells で となった and the whole くSDHを show <s:1> て な な とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが とが で となった となった となった な とが とが とが とが とが で となった となった となった となった な とが とが とが とが となった となった となった. さ ら に, SDH survived 伝 の 5 'upstream about 2 KB の obscene に chloramphenicol acetyltransferase heritage 伝 child links し た fusion heritage 伝 son を こ れ ら の cells に import し, CAT assay を line っ た. CAT みとめられな みとめられな った. <s:1> <s:1> とと, で of the first-generation cultured hepatocytes, and 伝 offspring of SDH 伝 CAT が occurrence される とと とと とと される される compared される. こ の よ う な liver cancer cells に お け る SDH posthumous son 伝 の 発 の OFF は tire seed liver と now with others の institutions に よ る の か, と い う point に つ い て も and せ て parsing す る designated で あ る.

项目成果

Chiseko Noda: "Developmental and GrowthーRelated Regulation of Expression of Serine Dehydratase mRNA in Rat Liver" Biochemcal and Biophysical Research Communications. 168. 335-342 (1990)

Chiseko Noda：“大鼠肝脏中丝氨酸脱水酶 mRNA 表达的发育和生长相关调节”《生物化学和生物物理研究通讯》168. 335-342 (1990)。

Chiseko Noda: "Characterization and Expression of the Serine Dehydratase Gene:Regulation by Glucocorticoids and Cyclic AMP" 6th International Symposium on Vitamin B_6 and Carbonyl Catalysis. (1990)

Chiseko Noda：“丝氨酸脱水酶基因的表征和表达：糖皮质激素和环 AMP 的调节”第六届维生素 B_6 和羰基催化国际研讨会。

Koichi Matsuda: "Identification of Glucocorticoidーand Cyclic AMPーResponsive Elements of the Rat Serine Dehydratase Gene:Difference in Responses of the Transfected and Chromosomal Genes" Biochemcal and Biophysical Research Communications. (1991)

Koichi Matsuda：“大鼠丝氨酸脱水酶基因的糖皮质激素和环磷酸腺苷反应元件的鉴定：转染基因和染色体基因反应的差异”生物化学和生物物理研究通讯（1991）。

野田 千征子: "栄養と肝細胞の遺伝子発現" 臨床栄養. 77. 865-872 (1990)

Chieko Noda：“肝细胞中的营养和基因表达”临床营养学 77. 865-872 (1990)。

Chiseko Noda: "Organization and Structure of 5' Flanking Region of Rat Serine Dehydratase Gene" Journal of Biochemistry. 108. 622-628 (1990)

Chiseko Noda：“大鼠丝氨酸脱水酶基因 5 侧翼区域的组织和结构”生物化学杂志。