極微弱発光を利用した白血球の活性酸素生成機構の研究

利用超弱发光研究白细胞活性氧产生机制

• 批准号: 04680267
• 负责人: 千葉 司
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680267/
• 关键词: 極微弱発光; 化学発光; ルシフェラーゼ; NADPH酸化酵素; フラビン; 白血球

白血球の活性酸素生成酵素(NADPH酸化酵素)系は、NADPHから電子を受け取り0_2へ電子を渡す、一種の電子伝達系と考えられている。電子伝達因子の一つとしてフラビン蛋白の存在が示唆されているが、その局在については諸説があり、未だ確定されていない。極微弱発光を利用したフラビンの微量定量法を検討し、フラビンの局在を調べた。1.極微弱発光測定装置を試作した。2.バクテリアのルシフェラーゼを利用したFMNの微量定量法を検討し、100fmolまでのFMNを再現性良く定量できる系を確立した。3.ホスホジエステラーゼ(5′-エクソヌクレアーゼ)を用いてFADをFMNに分解し、2と全く同様な方法で100fmolまでのFADを再現性良く定量できる系を確立した。4.未刺激の白血球(R)とミリスチン酸で刺激した白血球(S)より細胞膜と細胞質を分離し、それぞれについてフラビン含量を測定した。細胞膜中のフラビンは、ほとんどがFAD(FAD:FMN〓100:2)であり、RとSで量的な差は認められなかった。細胞質では、FAD:FMN〓4:1とFMNの割合が増大するものの、RとSで量的な差はなかった。5.細胞質を脂肪酸(ミリスチン酸、アラキドン酸)やSOSで処理すると、NADPH酸化酵素を構成する因子であるp67-phoxとp47-phoxが選択的に沈殿する。この処理によって得られる沈殿と上清のフラビンを測定し、それらが対照と差がなかったことより、p67-phoxとp47-phoxはフラビン蛋白でないことを明らかにした。極微弱発光を利用したフラビンに特異的な定量法を利用することで、NADPH酸化酵素系の因子の一つであると考えられるフラビン蛋白が、未刺激の状態の時から細胞膜に局在し、活性化に伴ってその局在は変化しないことを明らかにした。

The active acid-producing enzyme (NADPH acidifying enzyme) of leukocytes is a kind of electron transfer system. The existence of an electron transfer factor indicates that the protein is not present. Micro-quantitative method for detection of weak light emission 1. Test of a device for measuring weak light emission from dust 2. The method of microdetermination of FMN was studied and the reproducibility of FMN at 100fmol was established 3. FAD was decomposed by 5′- 4. Unstimulated white blood cells (R), stimulated white blood cells (S), separated cell membranes and cytoplasm, and determined the content of unstimulated white blood cells. The difference in the amount of R and S in the cell membrane is FAD(FAD:FMN 100:2). Cytoplasm, FAD:FMN 4:1 and FMN increase in the amount of R and S. 5. Cytoplasmic fatty acids (fatty acids, fatty acids), SOS and NADPH acidifying enzymes constitute factors such as p67-phox and p47-phox. The treatment of this kind of disease can be divided into two parts: p67-phox and p47-phox. A specific quantitative method for the use of NADPH acidifying enzyme system factors is used to examine the presence of NADPH acidifying enzyme system factors in cell membranes and the activation of NADPH acidifying enzyme system factors in cell membranes.

项目成果

Tsukasa Chiba: "Amphoteric Charge Distribution at the Chromophore Binding Site of N-Retiny l-Opsin Petermined by Dynamic Fluorescence Quenching" Bun.Gen.Educ.Tokyo Med.Dent.Univ.23. (1993)

Tsukasa Chiba：“通过动态荧光淬灭彼得挖掘的 N-视黄基 l-视蛋白发色团结合位点的两性电荷分布”Bun.Gen.Educ.Tokyo Med.Dent.Univ.23。

千葉 司(分担): "免疫学辞典" 東京化学同人, (1993)

千叶司（撰稿人）：《免疫学词典》东京化学同人，（1993）

千葉 司(分担): "活性酸素測定マニュアル" 講談社, 244 (1992)

千叶司（撰稿人）：《活性氧测量手册》讲谈社，244（1992）

Lucia S.Yoshida: "Determination of flavin conteuts in neutrophils by a sensitive chemiluminescence assay" Biochimica et Biophysica Acta. 1135. 245-252 (1992)

Lucia S.Yoshida：“通过灵敏的化学发光测定法测定中性粒细胞中的黄素成分”Biochimica et Biophysicala Acta。