△^<12>PGJ_2のヒト大腸癌株の増殖抑制および癌遺伝子に及ぼす影響

△^<12>PGJ_2对人结肠癌细胞生长抑制及癌基因的影响

• 批准号: 05807114
• 负责人: 吉田 典行
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05807114/
• 关键词: △^<12>プロスタグランディンJ_2; c-myc

最近シンクロペンテノン構造を有するprostaglandin(PG)の腫瘍増殖抑制効果が注目を浴びている。今回ヒト大腸癌細胞株であるLS174Tを用い△^<12>PGJ_2の腫瘍細胞増殖抑制効果を測定するとともに、同時期の細胞周期への影響をflowcytometeyにて解析し、併せてc-myc蛋白発現との関連について検討したので報告する。【方法】LS147T1.0×1.0^6個を培養液中(DME+10%FBS+NEAA)に播種し5%CO_2インキュベーター(37℃)で48時間培養後△^<12>PGJ_2を各種濃度(0〜10mug/ml)で負荷後48時間までの細胞抑制効果をMTTassay法にて行い、同時期の細胞周期への影響をflowcytometryにて解析した。核酸合成との関連は、Wallen等のDNase/PI法に準じflowcytometryを用い検討し、細胞周期との関連は、Rowlsy等の方法に準じpropidium indide(PI)とマウス抗c-myc蛋白モノクロナール抗体の二重染色法を用いflowcytometryによる解析を行った。【結果】1)LS174T細胞株に△^<12>PGJ_2を負荷後24時間、48時間のMTTassayにおいて用量依存的抑制効果を認め、IC_<50>は2.5mug/mlであった。2)IC_<50>濃度2.5mug/mlの△^<12>PGJ_2負荷後のflowcytometryでのPARA1解析では、負荷後24時間後の%G_0+G_1,%S,%G_2+Mの対照に対する比は、それぞれ115.9±1.6%,76.1±10.0%,93.5±6.1%で48時間では113.2±1.1%,75.7±7.8%,92.6±4.3%と、負荷後24、48時間ともにG_0G_1期細胞の蓄積が認められた。3)DNase/PI法による核酸合成との検討では△^<12>PGJ_22.5mug/ml負荷24時間、48時間、72時間後の負荷前との比率をみると、それぞれ98.1±16.9%,71.3±8.8%,61.9±3.8%と対照に比しRNA染色陽性率が低く、核酸合成阻害が認められた。4)△^<12>PGJ_22.5mug/mlの濃度負荷ではc-myc蛋白過剰発現率は対照に比し増加しc-myc蛋白と細胞増殖周期との関連の従来報告とは違う結果であり、今後さらなる検討を行う予定である。

Recently, the effect of prostaglandin(PG) on tumor growth inhibition has been studied. This <12>paper reports the effects of cell cycle inhibition on the expression of c-myc protein in colorectal cancer cell line LS174T. [Methods] LS147T1.0×1.0^6 cells were seeded in DME+10%FBS+NEAA medium for 48 hours and then cultured at 37℃ for 48 hours. Effects of <12>PGJ2 at various concentrations (0 ~ 10 ug/ml) on cell cycle inhibition at 48 hours after loading were analyzed by MTT assay. DNA synthesis and correlation, Wallen et al. DNase/PI method for flow cytometry analysis, cell cycle and correlation, Rowlsy et al. method for flow cytometry analysis, propidium indide(PI) and anti-c-myc protein, double staining method for flow cytometry analysis. [Results] 1) The dose-dependent inhibitory effect of MTTassay on LS174 T cell line <12>was 2.5ug/ml at 24 and 48 hours after PGJ2 loading<50>. 2) The ratio of PARA1 resolved by flowcytometry after <50>IC_2 concentration 2.5ug/ml <12>and 24h after loading was 115.9± 1.6%, 76.1 ± 10.0%, 93.5 ±6.1%, while the ratio of PARA1 accumulated in G_0G_1 phase was 113.2± 1.1%, 75.7 ± 7.8%, 92.6 ±4.3%. 3) DNA synthesis was detected by DNase/PI method<12>. The positive rate of RNA staining was 98.1± 16.9%, 71.3 ± 8.8%, 61.9 ±3.8% after 24, 48 and 72 hours of PGJ2 loading. 4) <12>The concentration load of PGJ_2 2.5ug/ml increased the c-myc protein over-expression rate and the correlation between c-myc protein and cell growth cycle.