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転写因子c-Mycと相互作用するタンパク質の絶対定量解析

与转录因子 c-Myc 相互作用的蛋白质的绝对定量分析

基本信息

批准号：
22KJ2385
负责人：
立石千瑳
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2385/
关键词：
c-Myc プロテオミクス

项目摘要

本研究の目的は、大規模ターゲットプロテオミクスプラットフォームであるiMPAQT法を用いたc-Mycインターラクトームの機能的役割と、c-Mycインターラクトームとがんの関係性について、解明することである。そのために、これまでの研究により同定を行った相互作用因子136種類を対象にiMPAQT法を用いた絶対定量解析を行う。第一に、iMPAQT法を行うために必要な内部標準ペプチドを作製し、LC-MS/MSによるMRMを実施することによってc-Myc相互作用因子の絶対定量が可能であることを確認した。第二に、レトロウイルスを用いて野生型c-Myc、12 種類のドメイン欠損変異体c-Myc、および11 種類のがん関連点変異体c-Mycを安定的に発現する細胞の樹立後、これらの細胞から精製したc-Myc複合体を用いてiMPAQT法を用いた絶対定量解析を実施した。得られた定量値から各相互作用因子のc-Mycに対する結合比を算出し、ここまでで得られた知見を各相互作用因子の複合体や分子機能などの既存の情報と統合を行った。そこで今後は、これらの結果から得られたc-Mycインタラクトームに重要であると推測された相互作用因子について、培養細胞系を用いて各遺伝子の過剰発現やノックダウンを行い、細胞増殖能の評価やRNAseq解析等の網羅的な遺伝子発現量解析を実施する。これによりc-Mycと各遺伝子の相互作用の意義や役割について明らかにする。

The purpose of this study is to explore the relationship between c-Myc and iMPAQT on a large scale. IMPAQT method is applied to quantitative analysis. The first, iMPAQT method is necessary for the implementation of MRM, LC-MS/MS, and the absolute quantification of c-Myc interaction factors. Second, the wild type c-Myc, 12 species of mutant c-Myc, and 11 species of mutant c-Myc were used for quantitative analysis of c-Myc complexes. The quantitative values of the binding ratios of the c-Myc pairs of the interacting factors were calculated, and the existing information of the interacting factors was integrated. In the future, the results of this study will be important to predict the interaction factors, the development of each gene in cultured cell lines, the evaluation of cell proliferation, and the analysis of RNAseq. The significance of the interaction between the two genes