転写因子c-Mycと相互作用するタンパク質の絶対定量解析

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本研究の目的は、大規模ターゲットプロテオミクスプラットフォームであるiMPAQT法を用いたc-Mycインターラクトームの機能的役割と、c-Mycインターラクトームとがんの関係性について、解明することである。そのために、これまでの研究により同定を行った相互作用因子136種類を対象にiMPAQT法を用いた絶対定量解析を行う。第一に、iMPAQT法を行うために必要な内部標準ペプチドを作製し、LC-MS/MSによるMRMを実施することによってc-Myc相互作用因子の絶対定量が可能であることを確認した。第二に、レトロウイルスを用いて野生型c-Myc、12 種類のドメイン欠損変異体c-Myc、および11 種類のがん関連点変異体c-Mycを安定的に発現する細胞の樹立後、これらの細胞から精製したc-Myc複合体を用いてiMPAQT法を用いた絶対定量解析を実施した。得られた定量値から各相互作用因子のc-Mycに対する結合比を算出し、ここまでで得られた知見を各相互作用因子の複合体や分子機能などの既存の情報と統合を行った。そこで今後は、これらの結果から得られたc-Mycインタラクトームに重要であると推測された相互作用因子について、培養細胞系を用いて各遺伝子の過剰発現やノックダウンを行い、細胞増殖能の評価やRNAseq解析等の網羅的な遺伝子発現量解析を実施する。これによりc-Mycと各遺伝子の相互作用の意義や役割について明らかにする。