転写因子c-Mycと相互作用するタンパク質の絶対定量解析

与转录因子 c-Myc 相互作用的蛋白质的绝对定量分析

• 批准号: 22KJ2385
• 负责人: 立石 千瑳
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2385/
• 关键词: c-Myc; プロテオミクス

本研究の目的は、大規模ターゲットプロテオミクスプラットフォームであるiMPAQT法を用いたc-Mycインターラクトームの機能的役割と、c-Mycインターラクトームとがんの関係性について、解明することである。そのために、これまでの研究により同定を行った相互作用因子136種類を対象にiMPAQT法を用いた絶対定量解析を行う。第一に、iMPAQT法を行うために必要な内部標準ペプチドを作製し、LC-MS/MSによるMRMを実施することによってc-Myc相互作用因子の絶対定量が可能であることを確認した。第二に、レトロウイルスを用いて野生型c-Myc、12 種類のドメイン欠損変異体c-Myc、および11 種類のがん関連点変異体c-Mycを安定的に発現する細胞の樹立後、これらの細胞から精製したc-Myc複合体を用いてiMPAQT法を用いた絶対定量解析を実施した。得られた定量値から各相互作用因子のc-Mycに対する結合比を算出し、ここまでで得られた知見を各相互作用因子の複合体や分子機能などの既存の情報と統合を行った。そこで今後は、これらの結果から得られたc-Mycインタラクトームに重要であると推測された相互作用因子について、培養細胞系を用いて各遺伝子の過剰発現やノックダウンを行い、細胞増殖能の評価やRNAseq解析等の網羅的な遺伝子発現量解析を実施する。これによりc-Mycと各遺伝子の相互作用の意義や役割について明らかにする。

这项研究的目的是使用IMPAQT方法，大规模的靶蛋白质组学平台以及C-MYC Intercontome与癌症之间的关系来阐明C-MYC Interactome的功能作用。为此，将对通过先前研究确定的136种类型的相互作用因素进行绝对定量分析。首先，我们证实，可以通过准备执行IMPAQT方法并使用LC-MS/MS进行MRM所需的内标肽来实现C-MYC相互作用因子的绝对定量。其次，在建立稳定表达野生型C-MYC的细胞，12个域缺陷突变体C-MYC和11种癌症相关点突变体C-MYC使用逆转录病毒，使用IMPAQT方法的绝对定量分析使用从这些细胞中纯化的C-MYC复合物进行。每个相互作用因子与C-MYC的结合比是根据获得的定量值计算得出的，到目前为止获得的发现与现有信息（例如每个相互作用因子的复合物和分子函数）集成在一起。因此，将来，从这些结果中获得的相互作用因子估计对C-Myc相互作用组很重要，使用培养的细胞系过表达并击倒了每个基因，并且将进行全面的基因表达分析，例如细胞增殖能力评估和RNaseQ分析。这将阐明C-Myc和每个基因之间相互作用的重要性和作用。

项目成果

c-Myc複合体の効率的な精製と構成因子の絶対定量解析

c-Myc复合物的高效纯化及构成因子的绝对定量分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 立石 千瑳;松本有樹修;松本 雅記;中山 敬一
• 通讯作者: 中山 敬一

がん遺伝子c-Myc複合体の絶対定量解析により明らかとなる新たな機能

癌基因 c-Myc 复合物的绝对定量分析揭示了新功能

• 发表时间: 2021
• 作者: 立石 千瑳;松本有樹修;松本 雅記;中山 敬一
• 通讯作者: 中山 敬一