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トランスゴルジ網様体におけるソーティング機構の分子解剖

跨高尔基体网状结构分选机制的分子解剖

基本信息

批准号：
06670006
负责人：
田中滋康
金额：
--
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

トランスゴルジ網様体(TGN)は,ゴルジ装置の最もトランス側に位置するコンパートメントであり,分泌の中枢と考えられている。本研究では,調節性分泌機構,特に分泌顆粒形成を含むソーティングの素過程に関与すると予想される分子が内分泌細胞のいずれのオルガネラに局在し,ホルモンの分泌動態と関連してどのように分布するかを免疫細胞化学的に明らかにするために行われた.低分子量G蛋白質(Rab6,Rab3)や三量体G蛋白質は,細胞内の物質輸送の鍵となる分子であるので,今回これらの分子に対する抗体を作製した.1.Rab3,Rab6,γ-アダプチン,TGN38のアミノ酸配列から,親水性でかつアミノ酸配列の相同性の低い領域を予測した.2.その部分のペプチドを合成し,ウサギに免疫し特異的な抗ペプチド抗体を得た.3.いずれの抗体もラット下垂体前葉のホルモン細胞を特異的に染めた.4.Rab6,γ-アダプチンはゴルジ領域を特異的に染めた.5.下垂体ホルモン産生細胞のモデル細胞であっるACTH産生腫瘍由来のAtT-20細胞や成長ホルモン産生腫瘍由来のGH4C1細胞でも同様な結果を得た.6.三量体G蛋白質のうちGsα,Gi3αに対する抗体は細胞膜を強く染めた.7.Rab3Aに対する抗体はラット下垂体のACTH細胞の分泌顆粒を,またRab3BはGH4C1細胞の分泌顆粒を強く染めた.このように同じRab蛋白質でも種類によりその局在が異なることが明らかにされた.今後,TGN38の抗体によりTGNの構造を明確に同定した上に,Rab6,Rab3や三量体Gタンパク質の抗体で二重標識を行い,それぞれの分子の局在を比較検討し,局在性の差異からTGNにおけるソーティング機構におけるそれぞれの分子の役割を考察したい。

The TGN is located at the top of the device and secreted from the central part of the device. In this study, regulatory secretory mechanisms, especially secretory granule formation, are involved in the process of hormone production, and molecular mechanisms are expected to be involved in the production of endocrine cells. Low molecular weight G protein (Rab6,Rab3) 2-trimer G protein is a key molecule for intracellular substance transport, and now it is used as an antibody to these molecules. 1. Rab3, Rab6,γ-receptor, TGN38 has an acid alignment, and its hydrophilicity has been estimated. 2. All parts of the protein have been synthesized. 3. Antibodies specific to the anterior lobe of the pituitary gland were detected by immune-specific antibodies. 4. Rab6. 5. The same results were obtained from AtT-20 cells from which ACTH was produced and GH4C1 cells from which ACTH was produced. 6. The same results were obtained from three quantities of G protein. Gi3α antibody strongly stained cell membrane 7. Rab3A antibody strongly stained secretory granules of pituitary ACTH cells and Rab3B antibody strongly stained secretory granules of GH4C1 cells. The same Rab protein is present in different regions. In the future, the structure of TGN38 antibody should be clearly identified. Rab6, Rab3 and three molecules should be identified by double labeling. The molecular structure of TGN38 antibody should be compared and the molecular structure of TGN38 antibody should be investigated.