細胞内ミトコンドリアの形態変化を制御する遺伝子の転写調節機構

控制细胞内线粒体形态变化的基因转录调控机制

• 批准号: 06670165
• 负责人: 若林 隆
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670165/
• 关键词: ミトコンドリア; 巨大ミトコンドリア; 脂肪酸不飽和化酵素; クローニング

ラット肝に発現する脂肪酸不飽和化酵素遺伝子の同定とクローニング哺乳類における細胞内の巨大ミトコンドリアの出現と脂肪不飽和化酵素遺伝子の転写制御との関係を明らかにする目的で、脂肪酸不飽和酵素遺伝子の同定とクローニングを試みた。まず、ラット肝臓および培養肝細胞からmRNAを抽出してcDNAライブラリーを作成した。次に、緑藻のdesAおよび酵母OLE1のcDNA配列から相同配列をいくつか選別し、プローブとなるオリゴヌクレオチドを合成した後、テイリング法によってdigoxygenin-UTPを反応させ、DIGプローブを作製した。このDIGプローブを使って、プラークハイブリダイゼイションを行ったところ、いくつかの陽性プラークが得られた。しかし、それらのクローンのDNAシークエンスを行ったところ、すべて脂肪酸不飽和化酵素遺伝子とのホモロジーがなかった。今後の研究計画直接ミトコンドリア膜の脂肪酸を不飽和化する酵素の遺伝子を同定することは困難であると思われるので、ラットの初代培養肝細胞を用いた細胞レベルでのミトコンドリア巨大化の実験系を確立し、ディファレンシャルディスプレイ法によって巨大ミトコンドリアを持つ肝細胞と持たない肝細胞との間で、発現の異なる遺伝子群を同定することを試みる。そのために、まず初代培養の培養液中への薬物投入によってミトコンドリアの巨大化とその阻止を人工的に引き起こす実験系を確立する。次に、変異した肝細胞と正常肝細胞との間で発現量の異なる遺伝子群を同定する。

To clarify the relationship between the expression of fatty acid unsaturated enzyme gene and the regulation of fatty acid unsaturated enzyme gene in mammalian cells. mRNA extraction from cultured hepatocytes and cDNA extraction from cultured hepatocytes The cDNA sequence of OLE1 in green algae and yeast is different from that of the same sequence. After synthesis, the cDNA sequence of OLE1 in green algae and yeast is different from that of OLE1 in yeast. The cDNA sequence of OLE1 in green algae is different from that of OLE1 in yeast. This is the first time I've ever seen a woman's face. The DNA sequence of fatty acid unsaturating enzymes was analyzed. Future research plans to establish a system for determining the identity of enzymes responsible for unsaturated fatty acids in primary cultured hepatocytes and to maintain the identity of enzymes responsible for unsaturated fatty acids in primary cultured hepatocytes. The difference between the two groups is determined by the test. To establish a system for the prevention of amplification and amplification of substances in the culture medium of primary culture. The amount of heterozygote that occurs between normal and secondary hepatocytes is constant.

项目成果

X.Liu,et al.: "Ultrastructural lacalization of retinal guanylate cyclase in human and monky retina." Exp.Eye.Res.59. 761-768 (1994)

X.Liu 等人：“人类和猴视网膜中视网膜鸟苷酸环化酶的超微结构局部化。”

M.Arai,et al.: "Confocal imaging of megamitochondria formation induced by ethanol and hydrazine in culture cells(RL-34)." Bioimages.,. in press.(1995)

M.Arai 等人：“培养细胞中乙醇和肼诱导的巨线粒体形成的共聚焦成像 (RL-34)”。

J.Antosiewicz,et al.: "Suppression of thehydrazine-induced formation of megamitochondria in the rat liver by α-tocopherol." Exp.Mol.Pathol.60. 173-187 (1994)

J.Antosiewicz 等人：“α-生育酚抑制肼诱导的大鼠肝脏中巨线粒体的形成。”Exp.Mol.Pathol.60 (1994)。