コレラ菌の産生する新しい下痢原因毒素,ZOT,の精製と解析

霍乱弧菌新型腹泻毒素ZOT的纯化与分析

• 批准号: 06670290
• 负责人: 倉園 久生
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670290/
• 关键词: Vibrio cholerae; 下痢; ZOT; 蛋白毒素; 精製

ZOTをcodeするDNA断片をpUCベクターにクローニングし、大腸菌で発現させたところ、菌の増殖が全く見られなかった。ZOTの塩基配列のうち疎水性部分は膜貫通部位と考えられるため(Koonin EV,FEBS Lett,312:3-6,1992)、大腸菌におけるZOTの強度の発現は大腸菌に対して致死的に働いたと考えられる。このため、全塩基配列のうち膜貫通部位と考えられるC末部分を削除し、N末部分のみをGlutathione S-transferase(GST)とのフュージョン蛋白として大腸菌で発現させた。このフュージョン蛋白より精製したZOTのN末部分でウサギを免疫し、ZOTのN末部分に対する特異抗体を作成した。この抗体を用いてZOTに対するビーズELISAを構築したところ、抗GST抗体をかなり含んでいることがわかった。このため、このconjugateをGSTで吸収しZOTに対する特異性を高めた。現在、この検出方法を用いて野生株からのZOTの精製を試みている。

ZOT, code, DNA fragments, pUC fragments, bacteria, bacteria. In ZOT, the water-borne part of the membrane was tested. (Koonin EV,FEBS Lett,312:3-6, 1992), the strength of the fungus, the strength of the ZOT, the lethality of the bacteria. The parts of the membrane were cut off at the end of C, and the protein was detected at the end of N, which was isolated from Glutathione S-transferase (GST). The protein was purified from ZOT, the N-terminal part of ZOT was immunized, and the specific antibody was made. The anti-GST antibody was detected by the use of ZOT antibody, anti-GST antibody and anti-GST antibody. Conjugate, GST, ZOT, ZOT, sex, sex and sex. At present, the method is to use the wild plant, the wild plant, the ZOT, the essence, the mother, the mother.

项目成果

Hisao Kurazono: "Distribution of genes encoding cholera toxin,zonula occludens toxin,accessory cholera toxin,and eltor hemolysin in Vibrio cholerae of diverse origins" Microbial Pathogenesis. (accepted). (1995)

Hisao Kurzono：“不同来源霍乱弧菌中编码霍乱毒素、闭塞小带毒素、辅助霍乱毒素和埃尔托溶血素的基因的分布”微生物发病机制。