コレラ菌(Vibrio cholerae)の産生する新しい下痢原因毒素、ZOT(toxin for zonula occludens)の精製と解析

霍乱弧菌产生的新型腹泻毒素ZOT（闭锁带毒素）的纯化与分析

• 批准号: 05770187
• 负责人: 倉園 久生
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770187/
• 关键词: コレラ菌; 下痢; 毒素; ZOT; 精製

現在、コレラ菌が産生する下痢原毒素としてはコレラ毒素(CT)の他にZOT(zonula Occludens Toxin)やACE(Accessory Cholera Enterotoxin)が報告されている。我々はまずZOTに着目して、この精製を試みることにした。まずコレラ菌GP14株の全菌体DNAからZOTをcodeする遺伝子断片(zot)をクローニングした。これを鋳型にして、両端に6amllI切断部位をもったzotをPCR法により構築し発現ベクターのpTrcllisに挿入した。しかし、このクローンは、増殖しなかった。そこで、作られる融合蛋白がpTrcllisよりも安定だと言われるpGEX-2Tに同断片を挿入したが増殖しなかった。1992年に、Kooninは、zotの核酸配列からZOTは膜蛋白である可能性をしめした。そこで、膜貫通部位と考えられるカルボキシ末端の3分の1を削除したdeletion mutantを構築して、pGEX-2Tに挿入し発現させたところ、目的とした融合蛋白がえられた。この融合蛋白から切り出して精製したZOTのアミノ末端部分で家兎を免疫し、低いタイタ-ではあるが抗ZOT家兎血清を得たので、この血清を用いてZOTに対する高感度ビーズELISAを作製した。現在、この検出系をもちいて、野生型と6acillus brevisの発現系で完全なZOTの精製を試みている。

Now, コ レ ラ が produce す る flow field under the original Toxin と し て は コ レ ラ Toxin (CT) の he に ZOT (zonula Occludens Toxin) や ACE (Accessory Cholera Enterotoxin) が report さ れ て い る. I 々 まず まずZOTに am looking at みる て, <s:1> refined を try みる とに とに た た た た. ま ず コ レ ラ GP14 strains の all bacteria DNA か ら ZOT を code す る posthumous son 伝 fragment (ZOT) を ク ロ ー ニ ン グ し た. こ れ を type where に し て, struck に 6 amlli cut parts を も っ た zot を PCR method に よ り build し 発 now ベ ク タ ー の pTrcllis に scions into し た. <s:1> な, ロ ロ ロ ロ な った, increase な な った った. そ こ で, make ら れ る fusion protein が pTrcllis よ り も settle だ と said わ れ る pGEX - 2 t に with fragment を scions into し た が raised colonization し な か っ た. In 1992, に, Koonin に, zot nucleic acid conjugated with らZOT <s:1> membrane protein である possibility を め た た た. そ こ で and transmembrane と exam え ら れ る カ ル ボ キ シ の three points at the end の 1 を pruned し た deletion mutant を build し て, pGEX - 2 t に scions into し 発 now さ せ た と こ ろ, purpose と し た fusion protein が え ら れ た. こ の fusion protein か ら り cutting out し て refined し た ZOT の ア ミ ノ end part で home 兎 を immune し, low い タ イ タ - で は あ る が resistance and the house of ZOT 兎 serum を た の で, こ の serum を い て ZOT に す seaborne る Gao Gan degrees ビ ー ズ ELISA を cropping し た. Now, こ の 検 out department を も ち い て, wild type と 6 acillus longer の 発 department で now completely な ZOT の refined を try み て い る.