活性発現を指標とするI-Cell病原因遺伝子のクローニング

以活性表达为指标克隆 I-Cell 致病基因

• 批准号: 06670791
• 负责人: 福島 久雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670791/
• 关键词: I-Cell病; リソソーム; 活性発現

I-Cell病は常染色体劣性遺伝する糖タンパク質の代謝異常症であり,原因はゴルジ体の中でリソソーム酵素の糖鎖のマンノース残基にリン酸を付加する酵素,N-アセチルグルコサミン-1ーリン酸転移酵素の欠損が原因である.この酵素の精製は非常に困難であるため,酵素学的な性質が充分に解明されておらず,遺伝子もクローニングされていない.この遺伝病のcDNAをクローニングするために遺伝子導入による活性の発現を指標とした方法を試みた.まずI-Cell病の患者由来の培養繊維芽細胞のChen-Okayamaの高効率トランスフェクションを用いてヒト肝pcD2 cDNAライブラリーを導入した.トランスフォーマントはneo耐性になるためG418を用いて選択した結果,約1万個のneo耐性トランスフォーマントが得られた.次にN-ピレン-ドデカノイルスフィンゴミエリンをアポプロテインイAと混合してリポソーム化したものを培地に加えて,細胞内に取り込ませる.その後,トリプシン処理をして生理的食塩水に懸濁し、366nmの紫外線を照射してから培地を加え,さらに培養を続けた.この方法でN-アセチルグルコサミン-1ーリン酸転移酵素を発現している細胞のみがピレンを分解することができて生存可能である.この選択により5個のトランスフォーマントが選択された.現在,これらのトランスフォーマントの細胞内,及び培地のリソソーム酵素活性の測定による細胞生物学的性質の検討をしている.さらに導入された遺伝子を回収し,その構造を解析している.

I-Cell disease is a metabolic disorder caused by autosomal degradation of sugar chain residues in the body due to enzyme degradation of N-terminal-1-terminal acid shift enzymes. The purification of these enzymes is extremely difficult, and the properties of enzymes are fully explained. The gene expression index of this gene was tested. Chen-Okayama's high efficiency gene expression system was introduced into the pcD2 cDNA expression system using cultured human embryonic cells derived from patients with I-Cell disease. G418 was selected as a result, about 10,000 neo tolerance tests were obtained. N-D-D After the treatment, the physiological food water suspension, 366nm ultraviolet irradiation and culture were added. This method enables the production of N-terminal-activated enzymes and the decomposition of these enzymes. This selection includes 5 categories. Now, the nature of cell biology is discussed in this paper. This paper introduces the structure analysis of the structure of the structure.

项目成果

Yang,M.,et al.: "A missence mutation CG^<197>→ A)in the α-L-fucosidase gane of Lucosidosis patients leads to lossot α-L-fucosidase" Glycosilation and Disease.1. 15-19 (1994)

Yang，M.，等人：“葡萄糖苷沉积症患者的α-L-岩藻糖苷酶gane中的错义突变CG^<197>→ A)导致lossot α-L-岩藻糖苷酶”糖基化和疾病。15-19。 (1994)

Hayashi.J.,et al.: "Functional and morpnological alinormal fpes of mifochondna in human cells containing mfochondrial DNA with pathogenic point autatiais in tRNA genes" J.Biol Chem.269. 19060-19066 (1994)

Hayashi.J.,et al.：“包含线粒体 DNA 的人类细胞中线粒体的功能和形态学异常 fpes，tRNA 基因中具有致病点 autatiais”J.Biol Chem.269。

福島久雄他: "先天性酵素欠損症の遺伝子治療" 小児科. 35. 15-22 (1994)

Hisao Fukushima 等人：“先天性酶缺乏症的基因治疗”《儿科学》35. 15-22 (1994)。

福島久雄,岡田伸太郎: "ラインゾームの基礎とラインゾーム病 先天性ラインゾーム病.遺伝子と細胞生物学" 学際企画, 6 (1994)

Hisao Fukushima，Shintaro Okada：“鼻体和鼻体疾病的基础知识；先天性鼻体疾病。基因和细胞生物学”跨学科项目，6 (1994)

Sakai,N.,et al: "Krabbedisease:Isolation and charactenjation of a full length cDNA for human galactocere brosidase." Biochem.Biophys.Res Comm.198. 485-491 (1994)

Sakai，N.，等人：“Krabbedisease：人半乳糖苷酶全长 cDNA 的分离和表征。”