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成長ホルモンによる遺伝子発現調節の分子生物学的研究

生长激素基因表达调控的分子生物学研究

基本信息

批准号：
06671014
负责人：
会田薫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
山梨医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】マウスsteroid 15α hydroxylase(P450_<15α>)は多くの純系マウスにおいて雄のみに発現しており、下垂体摘出マウスを用いた実験から、雄型の成長ホルモンGH分泌パターン(スパイク状、雄は持続型)がこの発現を調節していることを我々はすでに報告した。我々はin vitro transcription assay等によりP450_<15α>geneのpromoter領域を決定した。本研究では、このGHによる性特異的転写調節を明かにすることを目的とした。【方法】 450_<15α>のpromoter領域に相当するoligonucleotideをprobeとしてマウス肝cDNAexpression libraryをscreeningし、2個のDNA結合蛋白をcloningした(clone p109、clone108)。【結果】 clone p109はHMG box proteinをcodeしていた。clone p109のcodeする蛋白を大腸菌に発現させ抗体を作製した。しかし、肝におけるこのmRNA、および蛋白の発現には性差がなかった。さらにpost-translational modification、特にリン酸化の有無を、抗phosphotyrosine抗体を用いて検討したが、雌雄共にこの蛋白はリン酸化されていなかった。もう1つのDNA結合蛋白であるclone108は、sequenceの結果、マウスreplication factor C、140kDa subunic cDNA(mRFC140)と同一であった。clone108がcodeする蛋白を大腸菌に発現させ、抗体を作製した。そしてマウス肝におけるこのmRNA、および蛋白の発現をNorthern blot、Western blotで検討したが、それらに性差はみられなかった。【結論】我々は、性特異的発現を示すマウスsteroid 15α hydroxylase遺伝子のpromoter領域に結合する核蛋白cDNAを2種cloningした。しかし、これら2種の核蛋白の発現は、mRNA、蛋白レベル共に性差なく、従って我々が予期したGH分泌パターンに影響されなかった。これらの結果は、これら核蛋白はP450_<15α>のbasic expressionには影響するかもしれないが、性特異的発現には関与しないと考えられた。

[Objective] It is reported that steroid 15α hydroxylase(P450_<15α>) regulates the development of GH secretion in male, female and male pure-line plants. I'm in the vitro transcription assay, etc. P450_<15α>gene promoter field is decided. This study is aimed at identifying gender-specific regulatory factors. [Methods] 450_<15α> promoter domain corresponding oligonucleotide probe to cDNA expression library screening, cloning of 2 DNA binding proteins (clone p109, clone108). clone p109 HMG box protein code Clone p109 code is produced by E. coli and antibodies are produced. The expression of mRNA, protein and protein in the liver is different. Post-translational modification, presence or absence of specific protein, anti-phosphotyrosine antibody, and co-expression of proteinもう1つのDNA结合蛋白であるclone108は、sequenceの结果、マウスreplication factor C、140kDa subunic cDNA(mRFC140)と同一であった。clone108 code for Escherichia coli production and antibody control Northern blot, Western blot and Western blot analysis [Conclusion] We have demonstrated that there are two kinds of cloning of nuclear protein cDNA in the promoter domain of steroid 15α hydroxylase gene. The expression of two nuclear proteins, mRNA and protein, was affected by gene differentiation and protein secretion. The result is that nuclear protein P450_<15α> and its basic expression affect the development of sex-specific proteins.