血小板インテグリンGPIIb-IIIaによる蛋白チロシン燐酸化と脱燐酸化機構の解明

血小板整合素 GPIIb-IIIa 阐明蛋白质酪氨酸磷酸化和去磷酸化机制

• 批准号: 06671090
• 负责人: 高山 博史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671090/
• 关键词: 血小板; 蛋白チロシンキナーゼ; 蛋白チロシン、ホスファターゼ; インテグリン; 細胞骨格

1.血小板にトロンビン(Th)刺激を加えると蛋白チロシン燐酸化反応(PTP)が認められ、そのうちいくつかはCPIIb-IIIaを介した凝集と共に脱燐酸される。この蛋白チロシン脱燐酸化反応(PTD)は細胞外Ca^<2+>をキレートしたり、Ca^<2+>の代わりにMn^<2+>やNi^<2+>を細胞外に加えると抑制されることから、PTDはGPIIb-IIIaのみならず細胞外Ca^<2+>の流入によっても制御されていると考えられた。2.アクチン重合阻害剤であるサイトカラシンD(CytD)を血小板に加えた後Thで刺激するとPTPは著明に抑制された。このことから血小板のPTPはアクチン重合反応に依存していると考えられた。3.同様に、Th刺激時に認められるPTPおびよPTDに及ぼすカルパイン阻害剤のEST、MDL.カルパインの影響を検討したが、それらはいずれも影響を与えなかった。従って血小板のPTPおよびPTDにはカルパインは関与しないと考えられた。4.Th刺激を加えた血小板を融解し、膜骨格、細胞骨格、細胞質に分画した後、各々の画分でのPTP,PTDを検討したところ、大部分のPTPは細胞骨格で生じ、全細胞で認められたPTDは細胞骨格で起こることが判明した。このことは蛋白チロシンホスファターゼ(PTPase)が細胞骨格上で存在することを意味したので、PTPIB,PTPIC,SHPTP2の各PTPaseの細胞骨格への移行に検討した。その結果、PTPIBはGPIIb-IIIa依存性に、PTPICはTh刺激とGPIIb-IIIaの両者に依存して細胞骨格へ移行することが明らかとなった。さらにPTPICはGPIIb-IIIa依存性にチロシン燐酸化されることが観察された。このようにGPIIb-IIIa依存性のPTDには細胞骨格の再構築とPTPの両者が関与していることが明らかとなった。

1. Platelet phospholipid (Th) stimulates phosphorylation of protein phospholipids (PTP) Recognize められ, そのうちいくつかはCPIIb-IIIa を Introduction した agglomeration とKO にDephosphoric acid される.このprotein dephosphorylation reaction (PTD), extracellular Ca^<2+>をキレートしたり, Ca^<2+>の代わりにMn^<2+>やNi^<2+>を fine Extracellular に え る と inhibition さ れ る こ と か ら, PTD は GPIIb-IIIa の み なThe inflow of extracellular Ca^<2+> is controlled by the influx of extracellular Ca2+. 2. CytD (CytD), a coinciding inhibitor of Th and PTP, stimulates platelets and inhibits PTP.このことからplateletのPTPはアクチン coincident reaction 応にdepends on していると考えられた. 3. When stimulated by the same 様に and Th, the められるPTP おびよPTD に and the ぼすカルパイン blocking のE ST, MDL. The influence of カルパインのを検したが, the influence of それらはいずれもを and the えなかった.従ってplateletのPTPおよびPTDにはカルパインは关与しないと卡えられた. 4. After Th stimulation, platelets are melted, membrane lattice, cell lattice, and cytoplasm are divided into PTP and PTD.検検したところ, most of のPTP's cytoskeletal structure で生じ, whole cell でidentification められたPTD は cytoskeletal structure でrise こることが clarified した.このことはprotein チロシンホスファターゼ(PTPase) でexistence on the cell skeleton することをmeaning したので, PTPIB, PTPIC, SHPTP2, each PTPase has a cellular structure and a migration path.その results, PTPIB は GPIIb-IIIa dependence に, PTPIC は Th stimulation と GPIIb-IIIa の両 に dependence し て cytoskeleton へ migration す る こ と が 明 ら か と な っ た.さらにPTPICはGPIIb-IIIa-dependent にチロシン琐化されることが観看された.このようにGPIIb-IIIa dependenceのPTDにはReconstruction of the cell skeletonとPTPの両者が关与していることが明らかとなった.

项目成果

Ezumi,Y.,et al.: "Differential Regulation of Protein Tyrosine Phosphatasesby Integrin αIIbβ3 through Cytoskeletal Reorganization and Tyrosine Phosphorylation・・・・" J.Biol.Chem.(in press).

Ezumi, Y. 等人：“整合素 αIIbβ3 通过细胞骨架重组和酪氨酸磷酸化对蛋白质酪氨酸磷酸酶进行差异调节……”J.Biol.Chem.（出版中）。

Ezumi,Y.,et al.: "Regulation of the Glycoprotein IIb/IIIa-dependent Tyrosine-specific Dephosphorylation by Protein Tyrosine Phosphatases in Thrombin・・・・" Blood. 84. Supple-321a (1994)

Ezumi, Y. 等人：“凝血酶中蛋白酪氨酸磷酸酶对糖蛋白 IIb/IIIa 依赖性酪氨酸特异性去磷酸化的调节……” 84。Supple-321a (1994)。

Takayama,H.,et al.: "Involvement of GPIIb-IIIa on Human Platelets in Phosphotyrosine-specific Dephosphorylation" Biochem.Biophys.Res.Commun.194. 472-477 (1993)

Takayama, H., et al.：“磷酸酪氨酸特异性去磷酸化中 GPIIb-IIIa 对人血小板的参与”Biochem.Biophys.Res.Commun.194。