複特異性抗体による消化器癌治療の臨床応用のための基礎的研究

双特异性抗体治疗胃肠道肿瘤临床应用基础研究

• 批准号: 06671295
• 负责人: 竹山 廣光
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671295/
• 关键词: BFA; 膵癌; モノクローナル抗体; CD_3; MUCI

UCTH-1MoAbとMuse-11MoAbによる複特異抗体の作成と細胞障害の検討(in vitro)【目的】一方の活性基にT細胞と選択的に結合し細胞障害性を活性化する抗体、もう一方の活性基には腫瘍関連抗原と特異的に結合する抗体を有する複特異性抗体(bifunctional antibody,BFA)を作成し、それによる細胞障害活性を検討した。【方法】T細胞のCD3に対するUCTH-1MoAb(anti-CD3)と、消化器癌に広く発現する糖鎖抗原MUC-1に対するMuse-11MoAbを用いた.UCTH-1MoAbとMuse-11 MoAbの2種のF(ab′)2フラグメントを還元してFab′とした後、S-S置換反応により再結合し、BFAを作成した。エフェクター細胞にE/T比を20に設定した末梢血リンパ球(PBL)を用いた。細胞障害活性は51Cr releaseにより測定した。【成績】Musu-11およびBFAとの親和性は、6種の人消化器癌 Colo225,Colo226,KATOIII,MKN,PK1,PK9にて検討した結果、KATOIII,MKN,PK1,PK9いずれにも親和性をみとめ,特にPK9が高く、標的細胞として使用した。特異的細胞障害活性はBFA濃度依存性に増大した(BFA0.2,2,20,200μg/mlに対し各々6.6、11.5、9.5,12.4%)反応時間を4時間から8時間に延ばすと、細胞障害活性(BFA濃度200μg/ml)は1.9倍(22.5%)となった。PK9に対して細胞障害活性を示さない程度にIL-2で刺激したPBLを用いBFAの効果を検討すると、同様に濃度依存性に障害活性は増大し、BFA20μg/ml濃度において(4時間の反応時間)38%と著しい上昇を認めた。【結論】BFA感作リンパ球が消化器癌治療に応用できる可能性を認めた。

Preparation of bifunctional antibodies (BFA) against UCTH-1MoAb and Muse-11MoAb [Objective] To prepare bifunctional antibodies (BFA) against T-cell selected binding sites and activated cell-barrier binding sites specific to tumor-associated antigens. [Methods] UCTH-1MoAb(anti-CD3) and Muse-11 MoAb were used in response to MUC-1 in T cell CD3 and digestive cancer. F(ab′)2 of UCTH-1MoAb and Muse-11 MoAb were recombined with S-S substitution and BFA was prepared. The E/T ratio of the cells was set to 20 and the PBL was used. Cell damage activity was determined by 51Cr release assay. Musu-11 and BFA have high affinity for 6 kinds of human digestive cancer Colo225,Colo226,KATOIII, MKN, PK 1, PK9. The specific cell damage activity increased in a concentration-dependent manner (BFA 0.2, 2, 20, 200 μg/ml = 6.6, 11.5, 9.5, 12.4% respectively), and the cell damage activity (BFA concentration 200μg/ml) increased 1.9 fold (22.5%) after 4 hours and 8 hours. The inhibitory activity of PK9 increased in a concentration-dependent manner with IL-2 stimulation and PBL administration, and increased by 38% with BFA concentration of 20μg/ml (4 hours and reaction time). [Conclusion] The possibility of BFA in the treatment of digestive tract cancer is recognized.