ユビキチン系蛋白分解と選択的自食作用

泛素蛋白降解和选择性自噬

• 批准号: 06680680
• 负责人: 横田 貞記
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680680/
• 关键词: ユビキチン系蛋白分解; 選択的自食作用; 増殖ペルオキシソーム; 免疫電子顕微鏡; 自食作用; ペルオキシソーム; ユビキチン系

前年度は抗ユビキチン抗体の調製とそれを用いた免疫染色が検討された。薬物投与により増殖したペルオキシソームには約8倍のユビキチンとユビキチン結合タンパクを示す標識が認められた。これに対してミトコンドリアやライソソームでは約2倍の標識が見られた。これらの結果は増殖したペルオキシソームの個々のタンパクがユビキチン系タンパク分解によって処理されていることを示唆する。しかし、自食作用にユビキチン系がかかわるかどうかを示していない。そこで、Nycodenz密度勾配遠心法で分離したペルオキシソームを用いて前包埋法と後包埋法の免疫電顕染色を行なって観察した。詳細な観察の結果、ペルオキシソーム膜の細胞質側に金粒子の存在が認められた。これはペルオキシソーム膜タンパクがユビキチン化されることを示すものである。さらに分離したペルオキシソームのポリペプチドのユビキチン化をイムノブロットで調べると、抗ユビキチン抗体に反応するシグナルは無数見られたが、その中に4個のシグナルが明らかにペルオキシソーム増殖処理で増加した。とくに38KDaのシグナルは増殖処理ではじめて現れた。これらのポリペプチドの同定は検討中であるが、結果はペルオキシソームにユビキチン化されるタンパクが存在することを示すもので、免疫電顕の結果と一致する。これまでの研究で自食胞はER膜が標的のペルオキシソームを取り囲むことによって形成される。これはER膜が標的を選別認識することができることを意味する。結果を総合すると、ペルオキシソーム膜タンパクのユビキチン化が、ER膜がペルオキシソームを選別認識するのに関係している可能性がある。

In the previous year, <s:1> anti-ユ ビキチ <s:1> antibodies were <s:1> modulated とそれを and <s:1> た immunostaining が検 was used to obtain された. 薬 throw objects with に よ り raised colonization し た ペ ル オ キ シ ソ ー ム に は about 8 times の ユ ビ キ チ ン と ユ ビ キ チ ン combining タ ン パ ク を shown す logo が recognize め ら れ た. The が れに is about twice the <s:1> mark of て て トコ トコ ドリアやラ ドリアやラ ソソ ソソ ムで ムで ムで が られた. See られた. こ れ ら の results は raised colonization し た ペ ル オ キ シ ソ ー ム の a 々 の タ ン パ ク が ユ ビ キ チ ン department タ ン パ ク decomposition に よ っ て 処 Richard さ れ て い る こ と を in stopping す る. The autophagic action にユビキチ が is が わる わる <s:1> う う う を を shows て な な な. そ こ で, hook with far art で Nycodenz density separation し た ペ ル オ キ シ ソ ー ム を with い て before embedding method after と embedding method の immune power line 顕 dyeing を な っ て 観 examine し た. Detailed な観 examination <s:1> results show that ペ ペ <s:1> キシソ キシソ キシソ ム ム ム ム the presence of に gold particles <e:1> on the cytoplasmic side of the ム membrane <e:1> is が identified められた. こ れ は ペ ル オ キ シ ソ ー ム membrane タ ン パ ク が ユ ビ キ チ ン change さ れ る こ と を shown す も の で あ る. さ ら に separation し た ペ ル オ キ シ ソ ー ム の ポ リ ペ プ チ ド の ユ ビ キ チ ン change を イ ム ノ ブ ロ ッ ト で adjustable べ る と, resisting ユ ビ キ チ に ン antibodies against 応 す る シ グ ナ ル は see countless ら れ た が, そ の に in four の シ グ ナ ル が Ming ら か に ペ ル オ キ シ ソ ー ム raised colonization 処 Richard で raised plus し た. Youdaoplaceholder0 38KDa シグナ シグナ シグナ とくに expansion processing で じめて じめて current れた. こ れ ら の ポ リ ペ プ チ ド の with fixed は 検 beg in で あ る が, results は ペ ル オ キ シ ソ ー ム に ユ ビ キ チ ン change さ れ る タ ン パ ク が exist す る こ と を shown す も の で, immune electric 顕 の と consistent す る. こ れ ま で の research で eat cell は ER membrane が mark の ペ ル オ キ シ ソ ー ム を take り 囲 む こ と に よ っ て form さ れ る. The を selection of the が label on the <s:1> れ が ER membrane recognizes the する る とがで る る る とを とを meaning する. Results を 総 close す る と, ペ ル オ キ シ ソ ー ム membrane タ ン パ ク の ユ ビ キ チ ン が and ER membrane が ペ ル オ キ シ ソ ー ム を choose don't know す る の に masato is し て い る possibility が あ る.

项目成果

Yokota, S., Himeno, M., Kato, K.: "Formation of autophagosomes during degradation of excess perosisomes induced by di-(2-ethylhexyl)phthaklate treatment. lll. Fusion of early autophagosomes with lysosomal compartments." Eur. J. Cell Biol.66. 15-24 (1995)

Yokota, S.、Himeno, M.、Kato, K.：“邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯处理诱导的过量 perosisome 降解过程中自噬体的形成。III.早期自噬体与溶酶体区室的融合。”

S Yokota: "Degradation of excess peroxisomes by autophagy" Acta Histochemica et Cytochemica. (印刷中). (1995)

S Yokota：“通过自噬降解过量的过氧化物酶体”Acta Histochemica et Cytochemica（出版中）。

S.Yokota,T Hashimoto,A Ichiyama: "Immunoelectron microscopic localization of peroxisomal enzymes in the fibrillar structures of rat liver peroxisomes induced by administration of acetylsalicylic acid" Acta Histochemica et Cytochemica. (印刷中). (1995)

S. Yokota、T Hashimoto、A Ichiyama：“乙酰水杨酸诱导的大鼠肝脏过氧化物酶体纤维结构中过氧化物酶体酶的免疫电子显微镜定位”Acta Histochemica et Cytochemica（1995 年出版）。

S Yokota,T HaShimoto: "Immunocytochemical localization of L-a-hydroxyacid oxidase in dense bar of dumbbell shaped peroxisomes of mokey kidney" Histochemistry & Cell Biology. (印刷中). (1995)

S Yokota，T HaShimoto：“L-a-羟基酸氧化酶在烟肾哑铃形过氧化物酶体致密条中的免疫细胞化学定位”组织化学与细胞生物学（1995 年出版）。

Yokota, S., Hashimoto, T., Ichiyama, A.: "Immunoelectron microscopic localization of peroxisomal enzymes in the fibrillar structures of rat liver peroxisomes induced by administration of acetylsalicylic acid." Acta Histochem. Cytochem.28. 11-19 (1995)

Yokota, S.、Hashimoto, T.、Ichiyama, A.：“乙酰水杨酸诱导的大鼠肝脏过氧化物酶体纤维结构中过氧化物酶体酶的免疫电子显微镜定位。”