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初代培養肝細胞を用いたFasによるアポトーシスの研究

原代培养肝细胞Fas诱导细胞凋亡的研究

基本信息

批准号：
06680691
负责人：
冨田優美子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680691/
关键词：
アポトーシス Fas 初代培養肝細胞 Cキナーゼ

项目摘要

我々は既に初代培養成熟マウス肝細胞において核酸及び蛋白合成阻害剤存在下、抗Fas抗体によりアポトーシスが生じることや、また肝細胞にはアポトーシス抑制蛋白の存在が示唆され、これにCキナーゼが関与していることを明らかにした。今回は肝細胞のアポトーシスを抑制する蛋白質の同定と肝臓にけるFasによるアポトーシスの生理的意義を明らかにするための手がかりとして、幼若、成熟、老令マウスの肝細胞のFasによるアポトーシスについて比較検討した。1.肝細胞のアポトーシスを抑制する蛋白質の同定Cキナーゼ阻害剤であるH7存在、非存在で抗Fas抗体と^<32>P正リン酸で処理した肝細胞の抽出液を等電点電気泳動とSDS-PAGEで二次元電気泳動後、オートラジオグラフィーを行い両者のスポットを比較した。しかし、Cキナーゼに特異的なリン酸化蛋白質のスッポトは見つけられなかった。現在、この蛋白質の検出について等電点電気泳動のpH勾配やSDS-PAGEのゲル濃度を変えて検討中である。2.成熟、老化に伴う肝細胞のアポトーシスFasによる肝細胞のアポトーシスは老化した肝細胞の除去と肝臓サイズの維持に役割を果たすと考えられている。In vivoで幼若な肝細胞は肝小葉の周りから中心静脈へ移行する。この過程で細胞はだんだんと成熟し、その後老化、除去される。そこで幼若、成熟、老令マウスの肝細胞のFasによるアポトーシスについて検討した。抗Fas抗体はこれらの肝細胞を全て死滅させ抗Fas抗体の濃度依存性や経時変化に差がみられなかった。これらの結果からin vivoで肝小葉の中心静脈周辺にFasのリガンドが多くて細胞が老化すると死ぬのではないかと考えられた。現在、Fasのリガンドの肝小葉での分布について検討中である。

In the presence of inhibitors of nucleic acid and protein synthesis in primary cultured hepatocytes, anti-Fas antibodies were produced. In this paper, the physiological significance of Fas in liver cells is discussed. 1. The <32>isoelectric point electrophoresis and SDS-PAGE of hepatocyte extract were compared with the isoelectric point electrophoresis and SDS-PAGE of hepatocyte extract treated with anti-Fas antibody and anti-Fas antibody. C. The protein of acid is not specific. Now, the protein detection, isoelectric point electrophoresis, pH matching, SDS-PAGE and concentration change are discussed. 2. Mature and aging are accompanied by liver cell dysfunction and aging. In vivo, immature hepatocytes migrate from hepatic lobules to central veins. The process of cell maturation, post-aging, and removal Fas, mature and old liver cells Anti-Fas antibodies kill hepatocytes completely, and anti-Fas antibodies are concentration-dependent and time-dependent. The results are as follows: In vivo, the central vein of hepatic lobule is surrounded by Fas, and many cells are aged. Now, the distribution of Fas in hepatic lobules is discussed.