耳下腺細胞のムスカリン受容体共役脱リン酸化反応

腮腺细胞中毒蕈碱受体偶联的去磷酸化反应

• 批准号: 06807145
• 负责人: 古山 俊介
• 金额: --
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06807145/
• 关键词: 耳下腺; 22kDaタンパク質; 脱リン酸化; サイクリックAMP; ホスファターゼ2B; カルシウム; カルモジュリン依存性; オカダ酸

ラット耳下腺腺房細胞をサポニンにより可透過状態にし、[γ-^<32>P]ATPで標識すると、サイクリックAMP(cAMP)依存症に10万g沈渣分画の34、26、22kDaのタンパク質がリン酸化された。これらのリン酸化タンパク質はどれもセリン残基にリンが取り込まれていた。この3種のリン酸化タンパク質の脱リン酸化について、ムスカリン受容体刺激により引き起こされる細胞内カルシウムイオン上昇との関連を検討した。上記の方法で標識した分画をインキュベートとすると、34kDaタンパク質の脱リン酸化がみられた。しかし、26と22kDaタンパク質は影響されなかった。この脱リン酸化はセリン/スレオニンホスファターゼの阻害剤であるオカダ酸や、Zn^<2+>により阻害された。26kDaタンパク質は、オカダ酸の存在下においてMg^<2+>を添加することにより脱リン酸化が引き起こされた。これらの2種のリン酸化タンパク質の脱リン酸化においては、Ca^<2+>の存在を必要とせず、カルシウム系の関与は否定できた。一方、22kDaリン酸化タンパク質は、オカダ酸の存在下において、Ca^<2+>とカルモジュリンの添加により脱リン酸された。Ca^<2+>/カルモジュリン依存性のホスファターゼはホスファターゼ2Bと考えられたので、この酵素をウシ脳より精製し、リン酸化された22kDaタンパク質に添加すると、脱リン酸が引き起こされた。さらにこの精製ホスファターゼ2Bの抗血清を作成し、ウエスタンブロッティング法によりラット耳下腺腺房細胞でのホスファターゼ2Bの存在を確認した。上記の結果より、22kDaリン酸化タンパク質の脱リン酸化はcAMPによるシグナリングの下流にあり、カルシウム情報伝達系による調節が考えられ、細胞内Ca^<2+>を動かすムスカリン受容体活性化との共役が推測される。

The cells of the auricular gland are characterized by a permeable state,[γ-^<32>P]ATP, and AMP(cAMP)-dependent 100,000 g sediment fractions of 34, 26, and 22kDa proteins. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with me. The relationship between the three kinds of intracellular enzymes and the increase of intracellular enzymes was discussed. The method described above identifies the molecular structure of the 34kDa protein. 26:22 kDa and 26:22 kDa. This is the first time that a chemical has been used. In the presence of 26kDa amino acid, Mg^&lt;2+&gt; is added to the solution. The relationship between the two kinds of acidification and the existence of Ca^&lt;2+&gt; is necessary. In the presence of a single, 22kDa protein, the protein is purified by the addition of Ca^&lt;2+&gt; 2+. Ca &lt;2+&gt;/Ca &lt;2+&gt;/Ca &lt;3 +&gt;/Ca &lt;3 +&gt;/4 +&gt;/Ca &lt;3 +&gt;/Ca &lt;3 +&gt;/4&gt;/Ca &lt;3 The antiserum against 2B was prepared and the presence of 2B was confirmed. The above results indicate that the regulation of 22kDa protein deacidification and cAMP down-stream regulation, the regulation of intracellular Ca^&lt;2+&gt; activation and co-activation of protein receptors are postulated.

项目成果

H.SUGIYA,S.FURUYAMA & N.YOKOYAMA: "The dephosphorylation of 22kDa phosphoprotein by type 2B protein phosphatase in rat parotid acinar cells" Arch.Oral Biol.(in press).

杉谷H、古山S