マスト細胞の高親和性IgEレセプターに会合する細胞内シグナル伝達系の研究

肥大细胞高亲和力IgE受体相关细胞内信号转导系统研究

• 批准号: 07672336
• 负责人: 山下 俊之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672336/
• 关键词: マスト細胞; RBL-2H3; FcεRI; CD45

当初の研究計画に基づき、ラットRBL-2H3細胞におけるCD45の発現の解析を行った。ラットCD45の8種類のアイソタイプに共通した部位を認識することが知られている抗ラットCD45モノクローナル抗体OX-1を用いて解析したところ、FACS解析においてRBL-2H3細胞はOX-1との反応性を示したが、発現量は非常に少ないことが判明した。RBL-2H3細胞に発現しているCD45をOX-1を用いて免疫沈降したところ、分子量180kDのバンドが認められ、発現しているCD45アイソタイプは最短のもの(CD45RO)であることが示唆された。このことはRT-PCR法を用いたmRNAの発現の解析においても確認された。FcεRIとCD45の会合の解析のためにはCD45をイムノブロット法で検出することが不可欠であるが、OX-1はこの解析には使えないことが判明した。他の市販されている抗体はすべてCD45RO以外のアイソタイプに特異的なものなのでRBL-2H3には用いることができない。そこで、ラットCD45に対するポリクローナル抗体を調製することにした。RT-PCR法でCD45の細胞外部分をクローニングし、これをQIAexpress pQE発現ベクターに組み込んでヒスチジンタグを結合した融合タンパク質として大腸菌に大量生産させて精製し、ウサギに免疫する予定である。現在までにCD45のクローニングは完了し、発現ベクターに組み込んで生産の確認を行っている段階であるが、抗血清ができしだいCD45とFeεRIとの会合やFcεRIの凝集に伴なうCD45のホスファターゼ活性の変動などについて解析する予定である。

The original research project was to analyze the expression of CD45 in RBL-2H3 cells. 8 kinds of CD45 and its common parts were identified by FACS analysis, and the anti-CD45 antibody OX-1 was detected by FACS analysis. RBL-2H3 cells developed in the presence of CD45 OX-1, and the expression of CD45 OX-1 in the presence of CD45 OX-1 was detected. The mRNA expression was analyzed by RT-PCR. The analysis of the confluence of FcεRI and CD45 is indispensable for the detection of CD45 using the Internet browser method, and the analysis of OX-1 has made it clear. The antibody is specific to the RBL-2H3 and is not specific to CD45RO. The CD45 is the most powerful anti-inflammatory agent in the world. The extracellular part of CD45 was detected by RT-PCR, and the QIAexpress pQE was used to detect the protein. Now that the production of CD45 has been completed, it has been discovered that the production confirmation is in progress, and the antiserum is still in the process of meeting CD45 and FeεRI, and the agglutination of FcεRI is accompanied by the change in the activity of CD45.