敗血症の治療を目的とする肝臓由来のLPS活性化因子の作用機序の解析と単離精製

肝源性LPS激活剂治疗脓毒症的作用机制分析及分离纯化

• 批准号: 07672425
• 负责人: 佐藤 元信
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672425/
• 关键词: 肝臓由来蛋白因子; 敗血症; リポ多糖; エンドトキシン; lipid A

1.肝LPS不活性化因子の単離精製:この因子は可溶性の分子量約35kDのタンパクであること以外には性状がほとんど明らかになっていなかった。そこで、精製の戦略的手段を探るため、マウスの肝臓より得られた粗画分のpHおよび温度安定性、さらに、LPSのTNF分泌誘導活性の阻害に基づくLPS不活性化作用に及ぼすイオン強度、pHの効果を検討した。その結果、pHが8以上、4℃以下で安定であることが判り、pH8.5以上でのAnionicイオン交換クロマトグラフィーで効率よく精製できること、および、ゲル濾過クロマトグラフィーの組み合わせが有効であることが判明した。また、より特異的な精製手段として、lipid Aを固定化したカラムを作製し、これの有効性を検討しつつある。2.LPS不活性化の作用序の解析:肝LPS不活性化因子とLPSとの直接的な相互作用を解析するために、マウス肝臓の粗画分と^<14>C標識lipid Aとの特異的な結合を固相系で明らかにし、また、この因子がLipid A加水分解活性を有しないことを反応後のTLC分析により確認した。さらに、結合および不活性化のキネティクスから、温度および時間依存的なlipid Aと本因子との結合・会合がその作用に重要であることが示された。3.肝LPS不活性化因子による敗血症の治療をめざした検討:肝LPS不活性化因子の臨床応用のための基礎として、LPSおよびlipid Aデリバティブに対する当因子の粗画分のin vitroでの効果(TNF誘導の阻害、limulus lysate活性化の阻害)を検討し、いずれに対しても活性を有することが明らかになった。

1. Liver LPS inactivation factor purification: This factor is soluble and has a molecular weight of about 35kD. The methods of purification and purification of LPS were explored, and the pH and temperature stability of LPS were obtained. The inhibition of LPS secretion induced activity by LPS and the effect of LPS intensity and pH were discussed. Results: pH 8 or above, 4℃ or below, stability or stability, pH 8.5 or above, Anionic exchange rate or refinement, filtration or combination, etc. Special refining means, immobilization of lipid A, and effective detection 2. Analysis of LPS inactivation sequence: Analysis of direct interaction between LPS inactivation factor and <14>LPS; identification of Lipid A specific binding; identification of lipid A specific binding; identification of LPS inactivation factor; identification of lipid A hydrolytic activity; identification of LPS inactivation factor; identification of LPS inactivation factor; The combination and inactivation of lipid A and lipid A are important factors in the reaction of lipid A and lipid A. 3. Treatment of Hematotoxicity by Hepatic LPS Inactivation Factor: The Basis of Clinical Use of Hepatic LPS Inactivation Factor, LPS and Lipid A, and the Effect of Crude Fractions of Factors in Vitro (TNF Induced Inhibition, Limulus Lysate Activation Inhibition)

项目成果

Motonobu Satoh: "Inhibition of TNF-triggering Activity of Lipopolysaccharide by a Proteinaceous Factor from Normal Mouse Liver Extract" The Journal of Immunology. 155. 877-885 (1995)

Motonobu Satoh：“正常小鼠肝脏提取物中的蛋白质因子对脂多糖的 TNF 触发活性的抑制”《免疫学杂志》。