Wnt5aによる歯根膜線維組織再生誘導を基盤とした改良型意図的再植法の開発

开发基于Wnt5a诱导牙周膜纤维组织再生的改良意向再植方法

• 批准号: 15H06487
• 负责人: 長谷川 大学
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06487/
• 关键词: 歯根膜組織; 幹細胞; 石灰化抑制; Wnt5a; Ror2; JNK

Wntファミリー分子の一つであるWnt5aとそのシグナル は、増殖や分化、遊走など様々な細胞機能に関与することが知られている。我々は最近、Wnt5a がヒト歯根膜幹細胞の骨芽細胞様分化（石灰化）を抑制することを明らかにし、歯根膜組織が石灰化することなく線維性結合組織を維持するメカニズムにWnt5aが関与している可能性を見出した。そこで我々は、この現象の詳細なメカニズムを明らかにすべく解析を行ってきた。まず、多分化能を持つ未分化なヒト不死化歯根膜細胞クローンHPDLSC_2-23をWnt5a含有石灰化誘導培地にて一定期間培養した結果、非含有群と比較してアリザリンレッドS陽性反応ならびに骨関連遺伝子群（ALP、BSP、およびOsterix）の発現が有意に低下し、また同時に、細胞内シグナル因子であるJNKのリン酸化が亢進することが分かった。次に、Wnt5aのレセプターの一つとして知られるRor2に着目し、siRNAによりRor2の発現をノックダウンしたHPDLSC_2-23をWnt5a含有石灰化誘導培地にて培養した結果、Wnt5aによって低下したアリザリンレッドS陽性反応ならびに骨関連遺伝子群の発現が有意に回復し、同時にJNKのリン酸化が低下した。さらに、JNKの阻害剤であるSP600125をWnt5aとともに添加した石灰化誘導培地にてHPDLSC_2-23を培養した結果、Wnt5aによって低下したアリザリンレッドS陽性反応ならびに骨関連遺伝子群の発現が有意に回復した。以上の結果より、Wnt5aはRor2-JNKシグナル伝達経路を介してヒト歯根膜幹細胞の石灰化を抑制することが明らかになった。我々は本研究で得られた知見により、Wnt5aとそのシグナルを活用した改良型意図的再植法など、歯の長期的な保存を目標とした新しい歯根膜組織再生治療法の開発に繋げていくことができるのではないかと期待している。

Wnt5a is a molecule related to cell function, proliferation, differentiation and migration. Recently, Wnt5a has been shown to inhibit the differentiation (calcification) of dental root membrane stem cells and bone bud cells, and the possibility that Wnt5a may be involved in the maintenance of calcified dental root membrane tissues and linear binding tissues has been revealed. This is the first time that we have seen such a phenomenon. The results of culture of HPDLSC_2-23 and Wnt5a with lime induction for a certain period of time showed that the development of bone-related gene subgroups (ALP, BSP, Osterix) in non-containing groups was intentionally decreased, and the expression of JNK was increased simultaneously. In addition, Wnt5a was found to be active in Ror2, siRNA was found to be active in Ror 2, HPDLSC_2-23 was found to be active in Wnt5a, calcareous induction culture was found in Wnt5a, Wnt5a was found to be active in Ror 2, and JNK was found to be active in JNK. In addition, JNK inhibitor SP600125 was added to the culture medium HPDLSC_2-23. The results showed that Wnt5a was reduced and the development of bone-related gene groups was intentionally restored. These results suggest that Wnt5a may inhibit the calcification of root membrane stem cells by inhibiting Ror2-JNK pathway. In this study, we found that Wnt5a and Wnt5a were useful for the development of new methods for root membrane regeneration.