权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

癌の発生と悪性進展における低酸素応答機構と癌抑制機構のクロストークの役割

缺氧反应机制与抑癌机制之间的串扰在癌症发生和恶性进展中的作用

基本信息

批准号：
16H06891
负责人：
子安翔
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-08-26 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H06891/
关键词：
腫瘍低酸素 HIF-1 p53 悪性腫瘍

项目摘要

まず、HPF-4がHIF-1を活性化するメカニズムとして、HIF-1αのタンパク量への影響をウエスタンブロッティングで検討した。HPF-4の過剰発現によってHIF-1αのタンパク量は変化しなかった。次に、HPF-4がHIF-1αのtransactivation 活性に影響を及ぼすかどうかを検討するためにGal4DBDにHIF-1αの転写活性部の様々なdeletion mutant を連結させた融合タンパクを作成し、E1b Luciferase を用いてHIF-1の転写活性を発光量で検出することができるシステムを作成し、検証したところ、HIF-1αの二か所の transactivation domain についてHPF-4が活性の上昇をもたらすことが確認できた。また、共免疫沈降法で、HPF-4とHIF-1αのinteraction があることを示唆する結果を得た。次に、HPF-4の活性部位の同定を行うために、各ドメインのdeletion mutant 等を用いて上述の活性化の有無を調べたところ、5つあるドメイン中、3つのドメインを除去したmutant では活性が失われることが分かった。さらに、p53 がどのレベルでHPF-4の活性を抑制するかをメカニズムの異なるp53 の変異タンパクを用いて検証した。p53の変異体のうち、立体構造の異なるもの（R175H）、立体構造は同一であるがDNAへの結合能を持たないもの（R248W）、DNAへの結合はあるが転写活性を持たない4アミノ酸置換の変異体（Cell 145, 571:2011）のいずれもHPF-4の抑制能力を持たなかったことから、p53の直接のinteraction というよりは、下流遺伝子が関与していることが考えられた。

HIF-1 α and HPF-4 are active. The effects of HIF-1α on HIF-1 α activity are discussed. HPF-4 and HIF-1α have been found to be involved in the development of HPF-4. HIF-1α transactivation activity is affected by HPF-4, HIF-1α and HIF-1α deletion mutant is linked to HIF-1 α and HIF-1 α transactivation activity. The activation domain of HIF-1α and HPF-4 was identified. The results were obtained by co-immunoprecipitation and HPF-4 interaction with HIF-1α. The active site of HPF-4 was identified and deleted. The active site of HPF-4 was deleted and deleted. The mutant was deleted and the activity was lost. The activity of HPF-4 was inhibited by p53. The activity of HPF-4 was inhibited by p53. p53 and its heterogeneic structure (R175H), its heterogeneic structure (R248W), its heterogeneic DNA binding activity (Cell 145, 571:2011), its heterogeneic acid substitution activity (Cell 145, 571:2011), its direct interaction with p53, its downstream interaction with HPF-4.