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ゲノム&RNA編集酵素ADAR1が司るR-loop制御によるゲノム安定性維持機構

由基因组和RNA编辑酶ADAR1控制的R环控制的基因组稳定性维持机制

基本信息

批准号：
18H06054
负责人：
櫻井雅之
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-08-24 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H06054/
关键词：
ADAR RNA編集アデノシン脱アミノ化 R-loop ゲノム編集

项目摘要

ADAR発現抑制時にRNA:DNA特異的抗体を用いた解析によりRNA:DNA鎖量が増加していることが確認された。新たにFlag-ADAR免疫沈降産物の解析により、RNaseH1, RNaseH2ABC, DHX9, DHX21などRNA:DNA鎖分解酵素や二本鎖を巻き戻すヘリケース群がADARと複合体を形成していることを発見した。RNA:DNA特異的抗体用いた、またはADARを対象とした免疫沈降物から精製したRNA及びDNAの配列解析の結果から、R-loopと思われる領域候補が同定できたが、ノイズの高い問題が避けられないため、追加のR-loop特異的な免疫沈降法による精度向上が必要と判断し、RNA分解能失活変異を導入したFlag-RNaseH2ABC複合体発現系の作製を進めている。他方、培養細胞の表現型としてADAR発現抑制時にはγH2AXだけでなくRPA32やDNA-PKCsのリン酸化状態の上昇が観察され、DNA損傷の増大と修復系の活性化が示された。さらにCyclin B1だけでなく、Histon3、CDC2、PLK1のリン酸化状態の解析結果から、細胞周期のうち、顕著に細胞分裂期における停止しが明らかとし、これら表現型にともなうアポトーシスをPARP1分解の検出により確認した。これらはADARがRNA:DNA鎖量の増加を抑制することを示しており、ADARがR-loopの解消に寄与していると考えられる。さらに、がん細胞はADAR発現抑制時に、抗がん剤かつR-loop増加作用をもつカンプトテシンに対して数百倍の感受性を示して細胞死に至ることを発見した。加えて、ADAR発現抑制とカンプトテシン添加時の細胞周期をフローサイトメトリーにより解析し、細胞分裂期における細胞周期停止を確認した。ADAR発現抑制によるがん細胞のカンプトテシン感受性増強効果を証明した。

When ADAR appears to be inhibited, RNA: DNA-specific antibodies are analyzed and RNA: DNA locking capacity is increased and confirmed. Analysis of new たにFlag-ADAR immunoprecipitation products により, RNaseH1, RNaseH2ABC, DHX9, DHX21 などRNA: DNA lock decomposing enzyme や二本 lock を巻き戻すヘリケース群がADARと complex をformation していることを発见した. RNA: DNA-specific antibodies are purified with RNA andびDNA's alignment analysis results から, R-loop と思われるfield candidate が同定できたが, ノイズの高いquestion Question がけられないため、Additional のR-loop specific なimmunosedimentation method によるThe accuracy is improved がnecessary and judgmentし、R NA decomposition can be inactivated and the difference is introduced into the Flag-RNaseH2ABC complex. Other prescriptions and phenotypes in cultured cells: When ADAR is suppressed, it is γH2AX だけでなくRPA32やDN A-PKCs' acidification status is increased and DNA damage is increased, and the repair system's activation is shown.さらにCyclin Analysis result of B1 acidification state, Histon3, CDC2, PLK1 acidification state, cell cycle analysis, and 镕斕 cells The cleavage period has been stopped and the phenotype has been stopped. The PARP1 decomposition has been confirmed.これらはADARがRNA: DNA lock amount のincrease plus をinhibition することをshow しており, ADARがR-loop のsolved に Send and していると考えられる. Inhibition of ADAR expression in さらに and がん cells, and anti-R-loop enhancement effect in がんもつカンプトテシンに対してhundred times のsensitivityをshows してcell deathに to ることを発见した. Addition of ADAR and ADAR appearance inhibitors to the cell cycle of ADAR Analyze and confirm cell cycle arrest during cell division. It has been proven that ADAR inhibits the sensitivity of human cells and enhances its sensitivity.