ゲノム&RNA編集酵素ADAR1が司るR-loop制御によるゲノム安定性維持機構

由基因组和RNA编辑酶ADAR1控制的R环控制的基因组稳定性维持机制

• 批准号: 18H06054
• 负责人: 櫻井 雅之
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-08-24 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H06054/
• 关键词: ADAR; RNA編集; アデノシン脱アミノ化; R-loop; ゲノム編集

ADAR発現抑制時にRNA:DNA特異的抗体を用いた解析によりRNA:DNA鎖量が増加していることが確認された。新たにFlag-ADAR免疫沈降産物の解析により、RNaseH1, RNaseH2ABC, DHX9, DHX21などRNA:DNA鎖分解酵素や二本鎖を巻き戻すヘリケース群がADARと複合体を形成していることを発見した。RNA:DNA特異的抗体用いた、またはADARを対象とした免疫沈降物から精製したRNA及びDNAの配列解析の結果から、R-loopと思われる領域候補が同定できたが、ノイズの高い問題が避けられないため、追加のR-loop特異的な免疫沈降法による精度向上が必要と判断し、RNA分解能失活変異を導入したFlag-RNaseH2ABC複合体発現系の作製を進めている。他方、培養細胞の表現型としてADAR発現抑制時にはγH2AXだけでなくRPA32やDNA-PKCsのリン酸化状態の上昇が観察され、DNA損傷の増大と修復系の活性化が示された。さらにCyclin B1だけでなく、Histon3、CDC2、PLK1のリン酸化状態の解析結果から、細胞周期のうち、顕著に細胞分裂期における停止しが明らかとし、これら表現型にともなうアポトーシスをPARP1分解の検出により確認した。これらはADARがRNA:DNA鎖量の増加を抑制することを示しており、ADARがR-loopの解消に寄与していると考えられる。さらに、がん細胞はADAR発現抑制時に、抗がん剤かつR-loop増加作用をもつカンプトテシンに対して数百倍の感受性を示して細胞死に至ることを発見した。加えて、ADAR発現抑制とカンプトテシン添加時の細胞周期をフローサイトメトリーにより解析し、細胞分裂期における細胞周期停止を確認した。ADAR発現抑制によるがん細胞のカンプトテシン感受性増強効果を証明した。

ADAR 発 now inhibition に RNA, DNA specific antibody を with い た parsing に よ り RNA, DNA lock in が raised add し て い る こ と が confirm さ れ た. New た に Flag - ADAR immune sink product の parsing に よ り, RNaseH1 RNaseH2ABC, DHX9, DHX21 な ど RNA, DNA lock や decomposition enzyme 2 lock を 巻 き 戻 す ヘ リ ケ ー ス group が ADAR と complex を form し て い る こ と を 発 see し た. RNA, DNA specific antibody with い た, ま た は ADAR を like と seaborne し た immune sink content か ら refined し た RNA and DNA の び analytical の results match column か ら, R - loop と think わ れ alternate が る field with constant で き た が, ノ イ ズ の high い が avoid け ら れ な い た め, additional の R - loop specific な immune sink method に よ Youdaoplaceholder0 accuracy upward が necessary と to determine <s:1>, RNA decomposition can inactivate and change を introduce <s:1> たFlag-RNaseH2ABC complex occurrence system を prepare を enter めて る る る る る Fang, culture cell の phenotype と し て ADAR 発 now inhibition に は gamma H2AX だ け で な く RPA32 や DNA - PKCs の リ ン acidification rising state の が 観 examine さ の raised large と れ, DNA damage repair is の activeness が shown さ れ た. さ ら に Cyclin B1 だ け で な く, Histon3, CDC2, PLK1 の リ ン acidification condition の analytical results か ら, cell cycle の う ち, 顕 に cell division period に お け る stop し が Ming ら か と し, こ れ ら phenotype に と も な う ア ポ ト ー シ ス を PARP1 decomposition の 検 out に よ り confirm し た. こ れ ら は ADAR が RNA, DNA lock in の raised add を inhibit す る こ と を shown し て お り, ADAR が R - loop の null に send し て い る と exam え ら れ る. さ ら に, が ん cells は ADAR 発 suppression now when に, が ん tonic か つ R - loop rights and role を も つ カ ン プ ト テ シ ン に し seaborne て hundreds times の susceptibility を shown し て に cell death to る こ と を 発 see し た. Add え て, ADAR 発 now inhibit と カ ン プ ト テ シ ン の cell cycle when adding を フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に よ り parsing し, cell division period に お け る cell cycle stops を し た. The inhibitory effect of ADAR on the sensory enhancement of によるがん cells is を, which proves that <s:1> た.

项目成果

The Wistar Institute(米国)

威斯塔研究所（美国）

Discovering RNA editing by chemical methods

通过化学方法发现 RNA 编辑

• 发表时间: 2019
• 期刊: Methods Mol. Biol.
• 作者: Sakurai;M.*(Corresponding Author);Okada;S.;Ueda;H.
• 通讯作者: H.

実験医学

实验医学

• 发表时间: 2011
• 作者: 松田憲之;尾勝圭;田中啓二
• 通讯作者: 田中啓二

東京理科大学生命医科学研究所櫻井研究室

东京理科大学生物医学科学研究所樱井实验室