DNAメチル化がTDP-43の自己調節に与える影響に着目したALS病態の解明

阐明 ALS 病理学，重点关注 DNA 甲基化对 TDP-43 自身调节的影响

• 批准号: 19K23961
• 负责人: 小池 佑佳
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-02-26 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K23961/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症; TDP-43; DNAメチル化; スプライシング; 自己調節機構; 選択的スプライシング; 加齢; TARDBP

私は，TARDBP 3’UTR のDNAメチル化状態が選択的スプライシング機構を介し，TARDBPの発現量を規定するのではないかと推測した．まずはゲノム編集の手法により，HEK293T細胞のTARDBP 3 'UTR にあるCpG部位を特異的に脱メチル化させ，TARDBPの選択的スプライシング効率とmRNA発現量を評価した．次に，非中枢神経疾患患者 8例由来の凍結剖検脳組織 (運動野皮質，後頭葉皮質および小脳半球) を用いて，TARDBP 3 'UTR のCpG部位のメチル化状態を解析した．さらに，運動野皮質において，TARDBP 3’UTRのDNAメチル化率と選択的スプライシング効率の関連を検討した．TARDBP 3’UTRの15か所のCpG部位を標的特異的に脱メチル化させた細胞では，コントロール細胞と比べ，TARDBP pre-mRNAの選択的スプライシング効率が減弱し，TARDBP mRNA 発現量は約2倍に増加した．剖検脳組織の解析では，TARDBP 3'UTRのDNAメチル化率は，脳領域に依存して異なっていた．運動野皮質では，これらのCpG部位のDNAメチル化率は，年齢とともに減少していた．さらに，運動野皮質において，TARDBP 3'UTRの一部のCpG部位のDNAメチル化率は選択的スプライシング効率と有意に正の相関を示した．これまでの研究において，TARDBP 3'UTRのDNAメチル化状態が，TARDBP mRNAの発現量を規定することを示した．また，健常脳組織の解析から，TARDBP 3'UTRのDNAメチル化状態は，脳領域や加齢による影響を受けやすいことが示唆された．ALS病態におけるエピジェネティクスの寄与を明らかにするため，研究再開後は，孤発性ALS患者脳を用いて，TARDBP 3’UTRのDNAメチル化状態が変容しているか，調べる予定である．

In private, the system of the TARDBP 3'UTR DNA configuration selection is introduced, and the TARDBP specification specifies that the configuration is not valid, and that the editing set is modified, the HEK293T cell is responsible for the deregulation of the CpG location, and the TARDBP filter is selected for the response rate of the CpG location. The number of times is different. Eight patients with non-central neuropathic diseases were dissected. The tissue (motor dermis, posterior epidermis, small hemisphere) was used in 8 patients with non-central neuropathic disease. the pathological changes of the CpG site of TARDBP 3 'UTR were analyzed. The sensitivity of TARDBP 3 'UTRNAs was higher than that of TARDBP 3' UTRNAs, while that of TARDBP mRNA was about 2 times higher than that of TARDBP pre-mRNA, and that of DNAs selected by UTRs 3 'UTRs was much lower than that of DNAs. The sensitivity of TARDBP 3 'UTRP DNA is very high, and the field is dependent on the sensitivity of the DNA. The field depends on the sensitivity of the CpG, the sensitivity of the DNAs, the sensitivity of the DNAs, the sensitivity of the users, the sensitivity of the users, and the sensitivity of the users. For TARDBP 3 'UTRs, the selected DNA response rates are intended to show positive results. TARDBP 3' UTRs are sensitive to DNA fragmentation, while TARDBP mRNA measurements specify that they are sensitive. Normal tissues are used to analyze data, and TARDBP 3' UTRs are used to analyze data. After the study began, patients with isolated ALS were treated with TARDBP 3 'UTRDNA. The status of patients with isolated DNA was determined.

项目成果

小池 佑佳，加藤 泰介，廣川 祥子，小林 憲太，辻 省次，小野寺 理

小池佑香、加藤大辅、广川翔子、小林健太、辻庄二、小野寺修

• 发表时间: 2019
• 作者: Yuka Koike;Akihiro Sugai;Akio Yokoseki;Tomohiko Ishihara;Norikazu Hara;Junko Ito;Takeshi Ikeuchi;Akiyoshi Kakita;Osamu Onodera;Therapeutic strategy based on genome editing for dentatorubral-pallidoluysian atrophy.;歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症モデルマウスに対するゲノム編集効果
• 通讯作者: 歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症モデルマウスに対するゲノム編集効果

Alteration of TDP-43 autoregulation-relevant splicing by DNA methylation status of TARDBP DNA

TARDBP DNA 的 DNA 甲基化状态改变 TDP-43 自身调节相关剪接

• 发表时间: 2019
• 作者: Yuka Koike;Akihiro Sugai;Akio Yokoseki;Tomohiko Ishihara;Norikazu Hara;Junko Ito;Takeshi Ikeuchi;Akiyoshi Kakita;Osamu Onodera
• 通讯作者: Osamu Onodera

Yuka Koike，Taisuke Kato，Sachiko Hirokawa，Kenta Kobayashi，shoji Tsuji, Osamu Onodera

小池佑香、加藤大辅、广川幸子、小林健太、辻庄司、小野寺修

• 发表时间: 2019
• 作者: Yuka Koike;Akihiro Sugai;Akio Yokoseki;Tomohiko Ishihara;Norikazu Hara;Junko Ito;Takeshi Ikeuchi;Akiyoshi Kakita;Osamu Onodera;Therapeutic strategy based on genome editing for dentatorubral-pallidoluysian atrophy.
• 通讯作者: Therapeutic strategy based on genome editing for dentatorubral-pallidoluysian atrophy.