法医学的ストレスに対する交感神経反応を定量的に解析する

交感神经对法医应激反应的定量分析

• 批准号: 21890010
• 负责人: 高橋 識志
• 金额: $ 1.7万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890010/
• 关键词: 法医学; ストレス; 交感神経系

当初の計画で定量指標として掲げた、カテコラミン合成酵素のmRNA産生量については、RNA分解酵素により容易に分解され、そのままでは法医実務的な応用が難しいという問題点がある。そこで新たな定量指標として、20～25bpの1本鎖RNAであるmibroRNA(miRNA)を候補に挙げた。miRNAは現在まで約800種類が同定されているが、その機能には不明な点が多く、法医学的な先行研究は殆どない。本年度はmiRNAの発現量の死後変化による影響を検証した。未刺激下で過麻酔により安楽死させたラットを死後経過時間により4群(死亡直後・6時間後・12時間後・24時間後)に分け、各群から心臓・肺・肝臓・腎臓・脾臓・胸腺の6臓器を摘出し、RNA保存液処理を加えた。各臓器のホモジェネートから、キットを用いてmiRNA分画を分離後、miRNA特異的なプライマーを用い、成熟型miRNAを逆転写しcDNAとした。ラットの臓器特異的マーカーとされるlet-7a、let-7b、miR-16、miR-26a、miR-124、miR-1、miR-122を対象とし、snoRNA、U6 snRNAを内在性コントロールとした。上記マーカーにつき、リアルタイムPCR(TaqMan法)による定量を、ΔΔCt法を用いて行った。その結果、死亡直後の試料において、miR-1は心臓で、またmiR-122は肝臓で高発現であることが確認できた。また、死後経過時間との関連については、いずれの群でも大多数のマーカーが確認された一方、死後経過時間と各マーカーの発現量との間には関連性が認められなかった。miRNAの安定性に関する評価は、絶対定量法を用いて行う必要があると考えられ、次年度以降の課題となった。

In the original project, quantitative indicators were revealed, and the mRNA production of RNA synthase was easy to decompose, and the use of RNA in forensic practice was difficult. A new quantitative indicator, 20~25bp of 1-mer RNA, miRNA (miRNA), is a candidate. miRNA is now about 800 species, its function is unknown, and forensic research is in progress. This year, the impact of miRNA detection and postmortem changes was demonstrated. In the absence of stimulation, there were 4 groups (6 hours after death, 12 hours after death and 24 hours after death), and 6 organs of heart, lung, liver, kidney, spleen and thymus were extracted. RNA preservation solution treatment was added. The miRNA gene was isolated from each miRNA gene, and miRNA specific gene was used to reverse engineer mature miRNA cDNA. Let-7a, let-7b, miR-16, miR-26a, miR-124, miR-1, miR-122, snoRNA, U6 snRNA, etc. Note that PCR(TaqMan method) is used for quantitative analysis and Δ Ct method. The results showed that miR-1 and miR-122 were highly detectable after death. The time after death and the relationship between the majority of the group are confirmed. The time after death and the occurrence of each group are confirmed. MiRNA stability evaluation is necessary for the application of quantitative methods in the next year.