新型インフルエンザの超高感度簡易迅速多項目診断法の確立

新型流感超灵敏、简便、快速多项目诊断方法的建立

• 批准号: 21890311
• 负责人: 金子 愛
• 金额: $ 1.7万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21890311/
• 关键词: 医療・福祉; ウイルス; 感染症; トランスレーショナルリサーチ; マイクロ・ナノデバイス

本研究では、新型インフルエンザの迅速診断を目的として、超高感度・迅速・簡易イムノクロマト法の研究を行うことを目標とした。目標1.感染初期の潜伏期間にも検出可能な超高感度(数pg/ml)については、インフルエンザとhCG(Human Chorionic Gonadotropin、妊娠検査のマーカー)の両方について、発光法を利用し、市販のイムノクロマトの100,000倍の感度が達成できた。hCGの感度は、50fg/ml(=0.05pg/ml)である。目標2.迅速に(30分以内)に関しては、合計約15分の操作時間での検出が可能であった。目標3.超微量のサンプルから、に関しては、インフルエンザにおいて0.1pfu/mlの感度を達成した。この量は、患者の鼻腔ぬぐい液・咽頭ぬぐい液を通常のイムノクロマト診断用に処理した場合の1/100以下の超微量である。目標4.複数の異なる抗原型(H5、H7、タミフル耐性等、3～5項目)を同時に、については、A型インフルエンザの抗体2種(1種は2通りの希釈倍率)をメンブレンに固相化し、3項目同時測定を行い、3項目すべてにおいて、上記の0.1pfu/mlの感度を達成した。目標5.簡便に解析できる測定法に関しては、市販のイムノクロマトと同様の操作に、発光基質の添加が加わったのみの簡便な操作である。高感度化の手段として、当研究室において開発した超高感度同時多項目測定法(MUSTag法)を応用し、「MUSTagクロマト法」の開発を行う目標に関しては、hCGとインフルエンザの両方について、Real time PCRを使用し、系が機能し、抗原濃度に応じた定量性を示すことを確認し、市販のイムノクロマトの10倍程度の感度を達成した。また、蛍光標識したDNAをMUSTag化し、検出抗体として使用した蛍光法では、市販のイムノクロマトの1,000倍以上の感度が達成できた。

The purpose of this research is to conduct research on the new rapid diagnosis method and the ultra-high sensitivity, rapid and simple diagnostic method. Objective 1. During the incubation period in the early stage of infection, it is possible to use ultra-high sensitivity (several pg/ml) については, インフルエンザとhCG Gonadotropin, Pregnancy Check のマーカー)の両方について, 発光法をutilizationし, Commercial のイムノクロマトの100,000 times sensitivity がachievement できた. The sensitivity of hCG is 50fg/ml (=0.05pg/ml). Goal 2. Quickly (within 30 minutes) close the door, and the total operation time is about 15 minutes, and it is possible to open the door. Goal 3. The ultra-trace level of のサンプルから, に关しては, and インフルエンザにおいて0.1pfu/ml has been achieved. The amount of the patient's nasal cavity fluid and pharyngeal fluid is usually used for diagnostic treatment, and the ultra-trace volume is less than 1/100 in the occasion. Target 4. Plural heterogeneous antibody prototypes (H5, H7, タミフフルresistant, etc., items 3 to 5), simultaneous に, については, type A インフルエンザのantibodies 2 types (1 type) 2-pass りの西釈Magnification) をメンブレンにsolidificationし, 3-item simultaneous measurement を行い, 3-item すべてにおいて, and the above-mentioned sensitivity of 0.1pfu/ml was achieved. Goal 5. Simple analysis and analysis of test methods and commercial test methods. The operation of the same method is the same, and the addition of the light matrix is easy and easy to operate. The method of high sensitivity was developed, and the ultra-high sensitivity simultaneous multi-item measurement method (MUSTag method) was developed in the laboratory. 「MUSTagクロマト法」の开発を行うtargetに关しては、hCGとインフルエンザの両方について、Real The time PCR is used, the system is functional, the antigen concentration is quantitatively confirmed, and the commercially available PCR has a sensitivity of 10 times.また, 蛍光LOGO したDNAをMUSTag し, 検出antibodies としてUSE した蛍The light method and the commercially available のイムノクロマトの achieve a sensitivity of more than 1,000 times.