ゲノム解析による膵・胆管合流異常の進化系統学的発癌機序の解明

通过基因组分析阐明胰胆道汇合异常的进化和系统发育致癌机制

• 批准号: 21K20794
• 负责人: 高橋 幸治
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-08-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K20794/
• 关键词: 膵・胆管合流異常; 胆管癌; 胆膵癌パネル; multiplex PCR; ゲノム; 胆道癌; 先天性胆道拡張症

膵・胆管合流異常は、膵管と胆管が十二指腸壁外で合流し、膵液と胆汁が相互に逆流しうる先天性の形成異常である。非常に高率に胆道癌を合併し、小児を含む若年での発癌も認められるため、発癌メカニズムの解明は喫緊の課題である。膵・胆管合流異常についてのこれまでの検討では、膵液の胆道への逆流が炎症を惹起し、慢性化することで発癌する可能性が推定されているものの、詳細な発癌メカニズムは不詳である。また、胆管径により先天性胆道拡張症と胆管非拡張型の2型に分類され、予防的切除の規範となっているが、両者の胆道粘膜に相違があるかは解明されていない。本研究は、ゲノム異常の観点から膵・胆管合流異常の発癌機序、治療戦略の確立を目指すものであり、さらには治療標的遺伝子異常の同定を含め、膵・胆管合流異常の予後改善を実現することを目的とし、膵・胆管合流異常と胆管癌の手術検体を用いて、研究を進め、膵・胆管合流異常の発癌メカニズムを解明し、治療戦略の最適化を図ることを目的としている。膵・胆管合流異常例、胆管癌例の切除検体の癌部、非癌部（過形成、化生、異形成）より核酸（DNA/RNA）を抽出し、胆膵癌パネルを用いてmultiplex PCRを施行。PCR産物に対し、プライマー配列の除去、アダプターライゲーション、精製を行いライブラリを作製している。今後、テンプレート調整後、Ion ChefによりエマルジョンPCRと半導体チップローディングを施行し、Ion Protonを使用してNext-Generation Sequencing（NGS）を実施し、癌部、非癌部における分子プロファイルについて、進化系統学的連続性について検証するため、系統樹解析とPyClone解析を施行する予定である。

Anomaly of bile duct confluence, confluence of bile duct and bile duct outside duodenum wall, countercurrent of bile and bile, congenital abnormality of formation A very high rate of biliary tract cancer is associated with small children, including those who have developed cancer in the past few years. The abnormal confluence of bile ducts causes inflammation and chronicity. The possibility of cancer development is presumed. The details of cancer development are unknown. The diameter of the bile duct is different from that of the congenital biliary tract dilatation and the type 2 biliary tract non-dilatation. The purpose of this study is to investigate the mechanism and treatment strategy of abnormal bile duct confluence and to clarify the diagnosis and treatment of abnormal bile duct confluence. Treatment strategy optimization DNA/RNA extraction and multiplex PCR were performed in cases of abnormal biliary junction and cholangiocarcinoma, including cancerous and non-cancerous parts (formation, metaplasia and heterogenesis). PCR products are prepared by removing, refining and sequencing. In the future, after the adjustment of temperature, the implementation of Ion Chef PCR and semiconductor sequencing, the implementation of Ion Proton Next-Generation Sequencing (NGS), the implementation of molecular sequencing in cancer and non-cancer regions, the implementation of linkage detection in evolutionary systematics, phylogenetic tree analysis and clone analysis will be predetermined.