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タンパク質のリン酸化状態に着目した生活習慣病の病態把握及び治療への応用

通过关注蛋白质的磷酸化状态，了解与生活方式相关的疾病的病理学并将其应用于治疗

基本信息

批准号：
21K21247
负责人：
佐藤葵
金额：
$ 2万
依托单位：
Niigata University (2022)Gunma University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-08-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K21247/
关键词：
Phos-tag対角線電気泳動法生活習慣病

项目摘要

本研究ではタンパク質の機能的なリン酸化状態を検出及び同定することができる新技術、Phos-tag対角線電気泳動法を利用して肥満や糖尿病といった生活習慣病に係るタンパク質のリン酸化状態に着目した病態解明を目的としている。本年はリン酸化状態の異なるサンプルを用いて、前年に試行した、Phos-tag対角線電気泳動後にPVDF膜へ転写、抗原抗体反応による特定のタンパク質を検出する方法を用いて検討した。すると、核と細胞質分画、MAPKの阻害剤であるU0126添加によりFoxM1の泳動パターンに変化が見られた。しかしながら、Phos-tag対角線電気泳動の一次元目と二次元目で検出されるバンドのパターンに乖離がみられるなどの問題が発生した。一次元目と二次元目で検出されるバンドのパターンに乖離については、タンパク質の抽出方法により影響を受けることが明らかになった。Phos-tag対角線電気泳動によりリン酸化状態の異なるタンパク質スポットを特定後にそのスポットを質量分析計で測定を行う予定であり、質量分析計にかけるためのサンプル調整方法や機器操作、解析方法を現在習得中である。

In this study, new techniques and Phos-tag-based electrokinetic method were used to detect and identify the acidification state of the protein and its function in diabetes. This year's study on the method for detecting the difference between the acid state and the specific acid state was carried out on a trial basis in the previous year. The method for detecting the specific acid state after the Phos-tag-related angular electrophoresis was discussed. U0126 is added to FoxM1 's mobility profile. The problem of Phos-tag polarization in the first and second dimensions of the polarization has arisen. The first and second items are detected, and the second item is detected. The first item is detected, and the second item is detected. The third item is detected, and the fourth item is detected. Phos-tag pairs of angular electrokinetic parameters include the acid state, the quality of the sample, the determination of the mass analyzer, the determination of the mass analyzer, the adjustment of the mass analyzer, the machine operation, and the analysis method.