末梢代謝組織のリン酸化プロテオミクスより新たな生活習慣病治療ターゲットの探索

利用外周代谢组织的磷酸蛋白质组学寻找生活方式相关疾病的新治疗靶点

• 批准号: 22K17770
• 负责人: 佐藤 葵
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K17770/
• 关键词: Phos-tag対角線電気泳動法; 生活習慣病

本研究では、生活習慣病に関わる変動可能で機能的なリン酸化部位を明らかにし、新たな治療標的へと発展させるために、(1) 生体試料より得たタンパク質のリン酸化状態をPhos-tag対角線電気泳動法による評価系の確立、(2)生活習慣病の病態形成に関与する機能的なタンパク質のリン酸化状態の同定により、病態の予防・治療法を創出することを目的としている。本年はPhos-tag対角線電気泳動法を用いたタンパク質のリン酸化状態の評価系確立のために、着目しているタンパク質FoxM1のリン酸化状態の異なるサンプルを用いて、Phos-tag対角線電気泳動後にPVDF膜へ転写、FoxM1抗体による検出を行った。転写因子FoxM1は膵β細胞の増殖に中心的な役割を果たすことが明らかになっている（Shirakawa J. et al. Cell Metab. 2017）。FoxM1は、MAPKやChk2、Cdkファミリーにより、複数個所リン酸化されることが報告されているが、各リン酸化部位がどのような細胞外刺激により変化するのか、また、どのリン酸化部位がFoxM1の核内移行や転写機能の活性化に関与するのかは不明な点が多く残っている。すると、核と細胞質分画、MAPKの阻害剤であるU0126添加によりFoxM1の泳動パターンに変化が見られた。しかしながら、Phos-tag対角線電気泳動の一次元目と二次元目で検出されるバンドのパターンに乖離がみられるなどの問題が発生した。一次元目と二次元目で検出されるバンドのパターンに乖離については、タンパク質の抽出方法により影響を受けることが明らかになった。Phos-tag対角線電気泳動によりリン酸化状態の異なるタンパク質スポットを特定後にそのスポットを質量分析計で測定を行う予定であり、質量分析計にかけるためのサンプル調整方法や機器操作、解析方法を現在習得中である。

In this study, we investigated the possible functional changes in the acidification sites associated with lifestyle diseases, the development of new therapeutic targets,(1) the establishment of an evaluation system for the acidification status of biological samples,(2) the identification of the acidification status of biological samples associated with the development of lifestyle diseases, and (3) the identification of the acidification status of biological samples associated with the development of lifestyle diseases. The purpose of prevention and treatment of diseases This year, Phos-tag-based electrokinetic method was used to establish the evaluation system for the acidification state of FoxM1, and the evaluation system was used to determine the acidification state of FoxM1. Phos-tag-based electrokinetic method was used to write PVDF film and FoxM1 antibody. FoxM1, a transcription factor, plays a central role in the growth of beta cells (Shirakawa J. et al. Cell Metab. 2017）。FoxM1 protein expression, MAPK, Chk2, Cdk protein expression, multiple protein expression sites, multiple protein sites, multiple protein sites U0126 is added to FoxM1's mobility profile. The problem of Phos-tag polarization in the first and second dimensions of the polarization has arisen. The first and second items are detected, and the second item is detected. The first item is detected, and the second item is detected. The third item is detected, and the fourth item is detected. Phos-tag pairs of angular electrokinetic parameters include the acid state, the quality of the sample, the determination of the mass analyzer, the determination of the mass analyzer, the adjustment of the mass analyzer, the machine operation, and the analysis method.