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配偶子致死遺伝子による転移因子の活性化が染色体切断を誘導するメカニズムの解明

阐明配子致死基因激活转座元件诱导染色体断裂的机制

基本信息

批准号：
22K20578
负责人：
山森晃一
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

配偶子致死 (Gametocidal: Gc) 遺伝子は自身を持たない配偶子に染色体切断を誘導することで自身を優先的に後代に伝達させる ‘利己的な遺伝因子’である。本研究ではGc遺伝子の作用機序の特定につなげるために、Gc遺伝子が染色体切断を誘導する領域を特定し、切断作用が特定のDNA配列や染色体構造をターゲットにしているかどうかを明らかにする。本年度はまず、Gc遺伝子による染色体切断領域を特定する実験系の確立を試みた。放射線や紫外線などのゲノムストレスによるDNA鎖の切断は相同組換え (HR) や非相同末端結合 (NHEJ) によって直ちに修復される。本研究ではGc遺伝子によって切断される染色体領域を特定するために、切断されたDNAと相互作用することでHRを誘導するたんぱく質のγH2AXを抗体抗原反応によって検出することを試みた。今年度はウエスタンブロッティングによって、染色体切断時に生じるγH2AXたんぱく質を検出するための抗体の作成を行った。予備実験として、抗生物質のZeocinを処理することで染色体切断を誘導したコムギの根からたんぱく質を抽出し、抗体によるγH2AXの検出を行った。その結果、γH2AXを検出することに成功し、染色体切断を検出する実験系を確立した。今後、作成したγH2AX抗体を用いてクロマチン免疫沈降法 (ChIP) を利用し、Gc遺伝子によって染色体切断が誘導される領域の特定に進む。

Gametocidal (Gc) inheritance is self-sustaining, self-preferential, cross-generation inheritance is induced by chromosome excision, and self-preferential inheritance is induced by chromosome excision. In this study, the mechanism of action of Gc gene was studied in detail, and the induction of Gc gene chromosome cleavage was studied in detail. This year, we will try to establish a specific chromosome cleavage domain for the Gc gene. The cleavage of DNA locks caused by radiation or ultraviolet light can be repaired directly by homologous component replacement (HR) or non-homologous end binding (NHEJ). In this study, we tried to isolate the Gc gene from the chromosome domain and to isolate the Gc gene from the DNA interaction. This year, the production of antibodies against chromosome cleavage is carried out. In preparation for the treatment of Zeocin, the chromosome is cut off, the root is extracted, and the antibody is extracted. The results, γ H2AX detection, and chromosome fragmentation were successfully established. In the future, the production of γ H2AX antibodies will be carried out in specific areas such as chromosome cleavage and induction using the ChIP method.