免疫測定法による「田んぼの生きもの」の新たな簡易調査法

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本研究課題は、水田や農業水路の水に含まれる水生生物由来のタンパク質を免疫測定法（イムノアッセイ）により検出し、対象生物種の在否・多寡の推定可能性を探求することを目的とする。具体的には、①魚類や両生類などの対象生物種およびタンパク質を選定し、その検査試薬を作成する。②微量な対象タンパク質を検出できるように、効果的・効率的なサンプリング方法および前処理方法を明らかにする。③作成した方法による検出精度と検出力を示し、対象生物種の個体数密度の推定可否を明らかにする。本年度はこのうち①、および予備的に③に取組んだ。【①対象生物種の選定および検査試薬の作成】既存の抗原・抗体のデータベースの検索や既存の免疫測定キットの情報収集、免疫測定の受託試験を行う企業への聞き取りを行った。イムノクロマト法による既存キットとして、食品に含まれるアレルゲンの検査用に魚類および甲殻類の検査キットが、発電施設用にムラサキイガイ幼生等の検査キットが市販されていることが明らかになった。そこで、これらキットの利用可能性を追究する方針とした。【③検出精度、検出力および個体数密度の推定可否の検討】魚類および甲殻類の検査キットの検出精度と検出力を確認した。検出精度については、水路に生息する魚類（メダカ、ドジョウ、モツゴ、ヨシノボリ類）、両生類（ニホンアカガエル幼生、アズマヒキガエル幼生）、甲殻類（スジエビ類、アメリカザリガニ）、貝類（タイワンシジミ）をサンプルとして、魚類および甲殻類の検査キットによる検出可否を調べた。その結果、魚類の検査キットについては魚類のみ、甲殻類の検査キットについては甲殻類のみで陽性反応を呈することを確認した。また、検出力については、モツゴのサンプルについて10倍、100倍…と希釈して試験し、検出可能な濃度を把握した。