Effect of extracellular matrix from decellularized tissues on differentiation and migration of enteric nerve stem cells

脱细胞组织细胞外基质对肠神经干细胞分化和迁移的影响

• 批准号: 22K20655
• 负责人: 澁谷 聡一
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20655/
• 关键词: 再生医療; 組織工学; 脱細胞; ヒルシュスプルング病; 小腸機能不全; 腸管神経節; バイオリアクター; 神経幹細胞; Regenerative medicine; Tissue eingineering

ヒルシュスプルング病患児と腸管神経節が正常な患児のECMを比較するためヒルシュスプルング病根治術および乳児の人工肛門閉鎖術の手術時に検体を採取し蓄積している。できる限り同条件での比較を行うために脱細胞および組織評価は行っていない。実験に必要な環境を整えるために資材の購入、バイオリアクターとしてのポンプの動作確認を済ませ検体量が十分に達し次第(各群、3検体)、脱細胞を開始する予定である。ECMの比較を行う前の評価として脱細胞前の検体をホルマリン固定の行い切片を作成、神経節細胞の有無を非ヒルシュスプルング病患児との比較を行った。今後、これらに対してECMの免疫染色を行い脱細胞前後でECMが脱落しないかどうか比較するための指標とする。同実験の準備と同時に臨床データおよび病理データの収集を行っている。その中で、非ヒルシュスプルング病の患児の中でも病態によって神経節細胞の成熟度や絨毛の組織所見に違いが認められることがわかった。特に人工肛門の造設・閉鎖が行われた患児では人工肛門の肛門側を使用していた(便の注入を行っていたか)どうかで明らかな差が見られる。臨床データとの関連付けも可能であるので、今後は元々計画されていた評価に加えて人工肛門前後の腸管の比較も同時に行うことでさらなる知見を得られるようにする。今後、数名の患者がすでに手術を予定されているので検体の蓄積は半年以内に完了し、実験が速やかに開始できる見込みである。

为了比较Hirschsprung病儿童的ECM和患有正常肠神经节的患者的ECM，在手术期间收集并积累了用于赫希斯普伦氏病和婴儿结肠造口术的手术。尚未进行脱细胞和组织评估以在相同条件下进行比较。为了准备实验所需的环境，我们计划购买材料并确认泵作为生物反应器的操作，一旦样品体积达到足够的足够，将开始脱细胞化（每组三个标本）。在比较ECM之前，制备了福尔马林标本和切片的福尔马林固定前的样品，并将神经节细胞的存在或不存在与非希尔希斯普伦氏病的儿童进行比较。将来，ECM将被免疫染色，并用作比较ECM是否在脱落前后不会掉落的指标。正在准备该试验，并同时收集临床和病理数据。在研究结果中，发现在非希尔希斯普伦氏病的儿童中，观察到绒毛的神经节细胞成熟和组织学发现的差异，具体取决于这种情况。特别是，在发生结肠造口术的儿童中，是否使用结肠造口术的肛门侧有明显的差异（是否注入了粪便）。由于可以与临床数据相关联，因此除了最初计划的评估外，还将通过比较结肠造口之前和之后的肠道，从而获得进一步的见解。由于已经安排了几名患者进行手术，因此标本的积累将在六个月内完成，预计该实验能够及时开始。