自己免疫性神経炎症疾患におけるB細胞枯渇療法の作用機序の解明

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PBMCのmigration assayの装置の一部である3Dフローメンブレンが製造中止となったため，既製品の3Dフローメンブレンに替わる，新規3Dフローメンブレンを設計，作製した．当初のプロトタイプでは，メンブレン接着面の凹凸や，メンブレンの皺が問題であったが，設計の改良によってこれらの問題の軽減に成功した．次に，製造メーカー2社が製造したそれぞれのメンブレンの性能を評価し，本実験系に適したメンブレンを選定した．また，ひとつの3Dフローチャンバーには，3つのメンブレンが順に配置されているが，このメンブレンの配置の違いはmigrationに影響しないことを確認した．また，本実験系を用いて，過去の報告と同様にケモカインCCL2，CXCL12によってPBMCのmigrationが促進することを確認した．よって，新規3Dフローメンブレンを用いて作製した生理的流速負荷in vitro BBBモデルは，PBMCのmigrationの変化をとらえることができる評価系であると判断した．CD19 陽性B細胞分離用磁気ビーズを用いた処理によってPBMCからB細胞を除去できることをフローサイトメトリーで確認した．本研究において我々は， BBBを介した自己反応性リンパ球の中枢神経浸潤にはB細胞が必要であり，抗B細胞療法の作用機序は自己反応性リンパ球の中枢神経浸潤の抑制にあるという仮説を設定した．この仮説の立証を目的として，新規に作製したmigration assay 系を用いて，健常人PBMCからのCD19 陽性B細胞分離用磁気ビーズを用いてB細胞除去がPBMCのmigrationを抑制するかどうかを検討した．しかしながら，これまでの検討では，健常人PBMCからB細胞を除去してもPBMCのmigrationは抑制されなかった．