高速大規模解析が可能とするアルツハイマー病モデルにおける神経脱落様式の網羅的解析

使用高速、大规模分析对阿尔茨海默病模型中的神经缺陷模式进行综合分析

• 批准号: 22K20692
• 负责人: 伊藤 祥吾
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20692/
• 关键词: アルツハイマー型認知症; 神経変性; 部分的神経脱落; 形態スクリーニング; アルツハイマー病; 組織透明化

本研究の目的は、アルツハイマー型認知症（AD）における神経脱落は、細胞体から軸索末端に至るどの部位が、どの順で、どのように変性するのか、また、その脱落様式に共通原理は存在するのかを明らかにすることである。上記目的を踏まえ、2022年度は以下の研究に取り組んだ。(1) 神経修飾物質作動性ニューロンの軸索ならびに細胞体の免疫染色条件の確立アセチルコリン（ACh）、ノルアドレナリン（NA）、セロトニン（5-HT）の神経修飾物質作動性ニューロンに対し、軸索マーカーと細胞体マーカーのそれぞれに対する一次抗体を検討し、高いS/N比での免疫染色が可能な抗体の組み合わせを確立した。さらに、全脳解析のため短い露光時間で軸索を明瞭に可視化することを目的に、当研究室で独自に開発された蛍光TSA法であるFT-GO法（Yamauchi et al., Sci. Rep., 12:14807）を、選定した一次抗体に対して適用し、3種全てのニューロンの軸索の染色を確認した。さらに、アミロイドβ（Aβ）および細胞核の染色も含めた多重染色が可能な実験系を確立した。(2) 軸索定量が可能な全脳の画像取得方法の確立全脳の画像取得方法の確立のため、5-HTニューロンに対象を絞った。5-HTニューロンは神経突起が疎な脳領域と密な脳領域が存在するため、神経突起のトレーシングを検討する上で最も適していると判断した。系の確立のため、野生型マウスの全脳から冠状断の切片を作製し、5-HTニューロンの軸索をFT-GO法により染色した。神経突起が密な脳領域においても神経突起のトレーシングが可能となるように、厚みのある切片から切片の全領域が含まれる光学切片を取得する技術を確立した。

は の purpose, this study ア ル ツ ハ イ マ ー cognitive disorder (AD) に お け る 経 off は god, cell body か ら axon terminal に to る ど の parts が, ど で の, ど の よ う に - sex す る の か, ま た, そ の off others, there exist す に common principle は る の か を Ming ら か に す る こ と で あ る. The purpose of the above note is を to まえ, and in 2022, まえ and below, the に study group んだ. (1) God 経 decorate material of passivity ニ ュ ー ロ ン の axon な ら び に cell body の immune の dyeing conditions established ア セ チ ル コ リ ン (ACh), ノ ル ア ド レ ナ リ ン (NA), セ ロ ト ニ ン (5 - HT) の god 経 decorate material of passivity ニ ュ ー ロ ン に し seaborne, axon マ ー カ ー と cell body マ ー カ ー の そ れ ぞ れ に す seaborne る an antibody を 検 please <s:1>, high <s:1> S/N ratio で <s:1> immunostaining が may な antibody <s:1> group み and わせを establish た た. さ ら に, whole 脳 parsing の た い め short time で axon を clear に visualization す る こ と に を purpose, when laboratory で alone に 発 さ れ た 蛍 light the TSA method で あ る FT - GO method (Yamauchi et al., Sci. Rep., を came about 807), selected し た an antibody に し seaborne て し, three kinds of whole て の ニ ュ ー ロ ン の axon の dyeing を confirm し た. さ ら に, ア ミ ロ イ ド beta (A beta) お よ び の dyeing も nucleus containing め た multiple dyeing が may な be を 験 department establish し た. (2) quantitative が axon could な full 脳 の portrait の obtained method to establish the whole 脳 の の portraits made method established の た め, 5 - HT ニ ュ ー ロ ン に like を seaborne ground っ た. 5 - HT ニ ュ ー ロ ン は god 経 protrusions が 疎 な 脳 field と dense な が 脳 field exist す る た め, god 経 protrusions の ト レ ー シ ン グ を beg す 検 る で on most も し て い る と judgment し た. Is の establish の た め, wild type マ ウ ス の full 脳 か ら coronary and の slice を し, 5 - HT ニ ュ ー ロ ン の axon を FT - GO method に よ り dyeing し た. God 経 protuberant が dense な 脳 field に お い て も god 経 protrusions の ト レ ー シ ン グ が may と な る よ う に, thick み の あ る slice か ら slice の が full field containing ま れ る optical slices を obtain す る technology を established し た.