肺高血圧合併肺線維症モデル樹立とその解析手法の確立

肺纤维化合并肺动脉高压模型的建立及其分析方法

基本信息

  • 批准号:
    22K20774
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.83万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-08-31 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

慢性進行性に肺の線維化を来す特発性肺線維症の予後は3-4年程度と悪く、更に肺高血圧症を合併した場合の生命予後は極めて悪い。申請者は「特発性肺線維症における肺血管リモデリングが、肺線維症の病態進行に関与している」と仮説を立て、本研究を企画した。本研究では、(1)ブレオマイシン反復投与による肺高血圧合併肺線維症マウスモデルを樹立する。 (2)肺血管構成細胞と繊維芽細胞の共培養系を確立し、両者の相互作用を解析する。(3)同マウスモデル肺を薄切または脱細胞化した上で、血管構成細胞をその中で培養し、性質変化を解析する。性質変化の背景にある分子機序をフローサイトメトリー、PCR、マイクロアレイや質量解析を用いて同定を試みる。初年度は、ブレオマイシン反復投与による肺高血圧合併肺線維症マウスモデルの樹立を試みた。ブレオマイシン単回投与群では、C57BL6 10週齢雌マウスにブレオマイシン2mg/kgを気管内投与し、3週間後にsacrificeした。2回投与群では1.2mg/kgを気管内投与し、2週間後にブレオマイシン2mg/kgを気管内再投与し3週間後にsacrificeした。マッソントリクローム染色で肺繊維化を評価したところ、ブレオマイシン1回投与群に比べ、2回投与群はより強い線維化を呈していた。更に、2回投与群で肺動脈壁肥厚が認められた。2年目は肺線維化の程度、肺動脈壁肥厚の定量化を行い、肺高血圧合併肺線維症のモデルマウスとして使用可能か評価を行う。また肺組織より肺繊維芽細胞、肺動脈平滑筋細胞、肺血管内皮細胞をそれぞれ単離し、共培養系を確立、両者の相互作用を確認する予定である。
Chronic progressive pulmonary vascular disease may last for 3-4 years or longer, especially if pulmonary hypertension is present. The applicant stated that this study was planned in the context of the development of pulmonary vascular disease in patients with idiopathic pulmonary vascular disease. In this study,(1) repeated treatment of pulmonary hypertension with pulmonary vascular disease was established. (2)Establishment of a co-culture system of pulmonary vascular constituent cells and vascular germ cells and analysis of their interactions (3)In addition, the cell culture and property analysis of vascular constituent cells were also carried out. Molecular sequence analysis, PCR, mass spectrometry, and molecular weight determination In the early years, repeated administration of the drug resulted in pulmonary hypertension and pulmonary vascular disease. C57BL 6 10 weeks after injection 2mg/kg intra-tube injection 3 weeks after injection After 2 weeks, the dose of 1.2 mg/kg was administered in the same tube, and after 2 weeks, the dose of 2mg/kg was administered in the same tube, and after 3 weeks, the dose was administered in the same tube. The color of the lung is different from the color of the lung. The pulmonary artery wall hypertrophy was recognized by the two groups. 2-year-old objective: to evaluate the degree of pulmonary vascular maintenance, quantification of pulmonary arterial wall hypertrophy, and possible use of pulmonary hypertension combined with pulmonary vascular disease. Lung tissue, pulmonary vascular endothelial cells, and vascular endothelial cells were isolated, co-cultured, and their interactions were identified.

项目成果

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