シスプラチン耐性分子メカニズムに着目した新規免疫療法

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尿路上皮癌は、泌尿器系悪性腫瘍の中でも致死率が高い疾患である。シスプラチン（CDDP）を中心としたプラチナ製剤は尿路上皮癌治療のキードラッグとなるが、化学療法抵抗性が問題となる。我々は、化学療法抵抗性尿路上皮癌に対する有効な治療法開発を目的とし、リガンドーム解析による膀胱がん幹細胞からHLA-A*02:01拘束性のClaspinペプチド（HLA-A2/Claspinぺプチド）を癌抗原ペプチドのひとつとして同定した。さらに、膀胱がん細胞株（UM-UC-3）にCDDPを添加培養し続けることで樹立したCDDP耐性細胞（UM-UC-3 CR）でのClaspinの強発現、およびClaspin遺伝子をsiRNAで欠失した耐性細胞株のCDDPに対する感受性の増加を示し、CDDP耐性に対するClaspinの重要な関与を明らかとした。そこで、本研究では、細胞表面上に提示される‘HLA-A2/Claspinぺプチド’を認識する特異的人工抗体開発を目的とした。はじめに、抗体の抗原を認識する可変領域の断片である軽鎖可変領域と 重鎖可変領域を柔軟なをリンカー配列で連結し、Ｃ末端にHis-tagを結合させた一本鎖抗体（scFv）を基本構成とする複数の候補抗体クローンをファージディスプレイ法により獲得した。このHLA-A2/Claspinペプチド複合体特異的scFvのタンパク質を大腸菌より作製し、ELISA法により11種類の陽性クローンを選定した。次に、これら候補抗体scFvの中からフローサイトメトリーおよび免疫蛍光染色法を用い、Claspin ペプチドに対し、特異的かつ高い反応性を示すクローンを特定できた。さらに、特定した抗体はUM-UC-3 CR細胞を認識することを確認し、本研究で作製したscFv抗体がClaspinを高発現するCDDP耐性膀胱がん細胞に反応する特異的抗体である可能性を示した。