Identification of factors inducing ferroptosis in ovarian endometriosis by using CRISPR library

利用CRISPR文库鉴定卵巢子宫内膜异位症的铁死亡诱导因素

• 批准号: 22K20786
• 负责人: 田口 登和子
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20786/
• 关键词: 卵巣; 子宮内膜症; フェロトーシス; 遺伝子編集; ゲノム編集

異所性子宮内膜症は多くの女性が罹患している疾患であり、不妊症や癌化に関連があるとされるにもかかわらず、その病態は明らかではない。卵巣子宮内膜症において貯留した血液中の自由鉄から活性酸素が発生し酸化ストレスが高く、鉄イオン依存性におこる細胞死であるフェロトーシスが誘導されやすい状態であり、その状態で残存する卵巣子宮内膜症細胞においてはフェロトーシスへの抵抗性を有していると考えられる。本研究では、CRISPR libraryを利用して子宮内膜細胞の鉄過剰状態におけるフェロトーシス制御因子を同定し、同定された分子が子宮内膜症においてフェロトーシスを誘導することが可能かの検証を行う。この研究の結果により、フェロトーシスへの脆弱性を高めること自体が、卵巣子宮内膜症において残存上皮細胞の消失に至らしめ、卵巣子宮内膜症の画期的な治療法となることが期待される。昨年度の研究では、不死化子宮内膜上皮細胞 (JCRB1545EPC-1) を用いて、まずは至適な鉄濃度については過去の文献を参照し、MTS assayで検討して検証した。その後JCRB1545EPC-1細胞において、CRISPR Brunello knockout library を導入し、鉄過剰状態と鉄非過剰状態の条件で、生存する細胞のCRISPR gRNAを比較するためにNGSに提出し、候補遺伝子を同定を試みた。2回NGSを提出し、鉄剤投与なし群、鉄剤投与群、鉄剤投与＋フェトローシス阻害剤投与群の解析結果の差から候補遺伝子が現在挙がっているが、複数回検証することで再現性を担保するため、NGSを追加で行い結果を待っている。

Different temper by intrauterine membrane disease more than は く が の women suffering from し て い る disorders で あ り, not a perfect や canceration に masato even が あ る と さ れ る に も か か わ ら ず, そ の pathological は Ming ら か で は な い. Egg 巣 endometrial disease に お い て retention し た objects の free iron in the blood か ら acid active element が 発 raw し acidification ス ト レ ス が high く objects, iron イ オ ン dependency に お こ る cell death で あ る フ ェ ロ ト ー シ ス が induced さ れ や す い state で あ り, そ の state remaining で す る eggs 巣 endometrial disease cells に お い て は フ ェ ロ ト ー シ ス へ の resistance を have し て い Youdaoplaceholder0 tests えられる. This study で は, CRISPR library を using し て endometrial cells の iron objects through turning state に お け る フ ェ ロ ト ー シ ス suppression factor を with し, with fixed さ れ た molecular が endometrial disease に お い て フ ェ ロ ト ー シ ス を induced す る こ と が may か の 検 line card を う. こ の findings の に よ り, フ ェ ロ ト ー シ ス へ の high vulnerability を め る こ と autologous が, egg 巣 endometrial disease に お い て residual epithelial cells の に to ら し め, egg 巣 endometrial disease の painting period な therapy と な る こ と が expect さ れ る. Yesterday annual の research で は, undead endometrial epithelial cells (JCRB1545EPC - 1) を い て, ま ず は objects to optimum な iron concentration に つ い て を は の past literature reference し, MTS assay で beg し 検 て 検 card し た. After そ を JCRB1545EPC-1 cells にお にお て て, CRISPR Brunello knockout library を introduction にお, iron overpass state と iron non-overpass state <s:1> condition で, survival する cells <s:1> CRISPR gRNAを compares するためにNGSに to propose <s:1>, candidate 伝 を を and を test みた. 2 back to NGS を proposed し objects, iron cast with one な し group of objects, iron cast and group, one of iron objects cast with one + フ ェ ト ロ ー シ ス cast and resistance against one group of poor analytical results の の か ら alternate heritage 伝 son が now 挙 が っ て い る が, plural back 検 す る こ と reproducibility で す を guarantee る た め, NGS を additional line で い results を stay っ て い る.