発がん過程における細胞老化への運命決定の分子基盤解明

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本研究の目的は、腫瘍組織における細胞老化関連遺伝子p16とp21の発現変動が細胞の運命決定に及ぼす影響を明らかにすることである。本年度は、腫瘍組織におけるp16とp21タンパク質の発現変動を明らかにするために、tetOnシステムを用いて全身性に発がん性変異体であるKras G12Dを強制発現し形成した皮膚の腫瘍組織におけるp16およびp21陽性細胞の割合を蛍光染色で評価することを試みた。研究者らは、これまでにp16およびp21を発現した細胞をGFPで標識するレポーターマウスを作製している。このp21レポーターマウスにおける皮膚腫瘍組織について、過去にp21を発現したことを示すGFP陽性細胞中のp21タンパク質および増殖マーカーKi67の陽性率を定量した。その結果、GFP陽性細胞のうちp21陽性細胞は35.8%、Ki67陽性細胞は25.5%であることがわかった。同様に、p16レポーターマウスに作製した腫瘍においてもp16タンパク質および増殖マーカーKi67の陽性率を定量を試みた。しかしながら、DABによる抗体染色ではp16タンパク質の発現を腫瘍組織で検出することができた一方で、蛍光染色では発現量が検出できなかった。これは、p16タンパク質の発現レベルが低いことが原因であると考え、チラミドシグナル増幅（TSA）によって蛍光染色にてp16タンパク質を検出可能な条件の検討を行った。