尿中細胞外小胞の物理的特性に着目した小児腎疾患の病態解析

国内の小児腎臓疾患を診療している8施設に協力依頼し収集した検体のうち、ナノ粒子追跡解析(NTA)に必要なサンプル量が十分確保できる20検体（健常児3例、小児CKD患者17例）を用いて、Tim4蛋白質アフィニティー法で尿中EVサンプルを精製した。405nmのレーザーと高感度のsCMOSカメラを搭載したNanoSight LM10 systemによるNTAを施行したところ、サンプルによって観測される粒子数に大きなばらつきを認め、正確な測定を可能とする適切濃度を検討の上、20サンプルの解析を完了した。ストークス-アインシュタインの関係式に基づき、個々の粒子のブラウン運動から健常児3例の尿中EVの粒子数、粒子径のデータを取得した。さらにこれらのデータを解析し、粒子のピークサイズの密度も明らかにした。得られた物理的パラメーターを用いて、健常児と小児CKD患者の2群比較を行ったところ、粒子数と粒子径には、統計的な有意差を認めなかったが、ピークサイズの密度は、小児CKD患者で有意に低下していることが判明した。さらに、尿浸透圧が粒子数、粒子径に影響を与えるという報告をうけ（Blijdorp et al.,2021）、NTAに使用した尿検体から尿中クレアチニン（uCr）値を測定した。粒子数とuCrは正の相関があり、両者は粒子径と負の相関があった。さらに、希釈尿から精製した尿中EVは濃縮尿から精製した尿中EVより、40-150nmのサイズの粒子の割合が減少し、150-1000nmのサイズの粒子の割合が増加するという結果が得られた。上記内容を含めて論文報告した（Takizawa K et al, iScience. 2022）

国内の小児腎臓疾患を診療している8施設に協力依頼し収集した検体のうち、ナノ粒子追跡解析(NTA)に必要なサンプル量が十分確保できる20検体（健常児3例、小児CKD患者17例）を用いて、Tim4蛋白質アフィニティー法で尿中EVサンプルを精製した。405nmのレーザーと高感度のsCMOSカメラを搭載したNanoSight LM10 systemによるNTAを施行したところ、サンプルによって観測される粒子数に大きなばらつきを認め、正確な測定を可能とする適切濃度を検討の上、20サンプルの解析を完了した。ストークス-アインシュタインの関係式に基づき、個々の粒子のブラウン運動から健常児3例の尿中EVの粒子数、粒子径のデータを取得した。さらにこれらのデータを解析し、粒子のピークサイズの密度も明らかにした。得られた物理的パラメーターを用いて、健常児と小児CKD患者の2群比較を行ったところ、粒子数と粒子径には、統計的な有意差を認めなかったが、ピークサイズの密度は、小児CKD患者で有意に低下していることが判明した。さらに、尿浸透圧が粒子数、粒子径に影響を与えるという報告をうけ（Blijdorp et al.,2021）、NTAに使用した尿検体から尿中クレアチニン（uCr）値を測定した。粒子数とuCrは正の相関があり、両者は粒子径と負の相関があった。さらに、希釈尿から精製した尿中EVは濃縮尿から精製した尿中EVより、40-150nmのサイズの粒子の割合が減少し、150-1000nmのサイズの粒子の割合が増加するという結果が得られた。上記内容を含めて論文報告した（Takizawa K et al, iScience. 2022）