尿中細胞外小胞の物理的特性に着目した小児腎疾患の病態解析

关注尿细胞外囊泡物理特征的小儿肾脏病病理分析

• 批准号: 22K20847
• 负责人: 滝澤 慶一
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20847/
• 关键词: 尿中細胞外小胞; 小児腎疾患; ナノ粒子追跡解析

国内の小児腎臓疾患を診療している8施設に協力依頼し収集した検体のうち、ナノ粒子追跡解析(NTA)に必要なサンプル量が十分確保できる20検体（健常児3例、小児CKD患者17例）を用いて、Tim4蛋白質アフィニティー法で尿中EVサンプルを精製した。405nmのレーザーと高感度のsCMOSカメラを搭載したNanoSight LM10 systemによるNTAを施行したところ、サンプルによって観測される粒子数に大きなばらつきを認め、正確な測定を可能とする適切濃度を検討の上、20サンプルの解析を完了した。ストークス-アインシュタインの関係式に基づき、個々の粒子のブラウン運動から健常児3例の尿中EVの粒子数、粒子径のデータを取得した。さらにこれらのデータを解析し、粒子のピークサイズの密度も明らかにした。得られた物理的パラメーターを用いて、健常児と小児CKD患者の2群比較を行ったところ、粒子数と粒子径には、統計的な有意差を認めなかったが、ピークサイズの密度は、小児CKD患者で有意に低下していることが判明した。さらに、尿浸透圧が粒子数、粒子径に影響を与えるという報告をうけ（Blijdorp et al.,2021）、NTAに使用した尿検体から尿中クレアチニン（uCr）値を測定した。粒子数とuCrは正の相関があり、両者は粒子径と負の相関があった。さらに、希釈尿から精製した尿中EVは濃縮尿から精製した尿中EVより、40-150nmのサイズの粒子の割合が減少し、150-1000nmのサイズの粒子の割合が増加するという結果が得られた。上記内容を含めて論文報告した（Takizawa K et al, iScience. 2022）

In the diagnosis and treatment of pediatric kidney disease in China, we cooperated with each other to collect the necessary samples according to the method of particle tracing analysis (NTA), and the necessary sample quantity was very ensured. In 20 samples (3 healthy children and 17 pediatric CKD patients), we refined the urine EV sample by using the method of Tim 4 protein. 405 nm high sensitivity sCMOS sensor is installed in NanoSight LM 10 system, NTA is implemented, the number of particles detected is large, the correct measurement is possible, the appropriate concentration is discussed, and the analysis of 20 samples is completed. The relationship between the number of particles in urine and the particle diameter of the urine was obtained. The particle size distribution is very small, and the particle size distribution is very small. 2 groups of patients with CKD are compared, the number of particles and the diameter of particles are determined, and the density of CKD patients is determined. (Blijdorp et al., 2021), NTA use of urine sample, urine sample, urine sample (uCr) value determination The number of particles is positive and the diameter is negative. In addition, it is hoped that the concentration of EV in urine will be reduced, and the separation of particles in the range of 40 - 150 nm will be increased. Takizawa K et al, iScience. 2022）

项目成果

腎機能障害診断マーカーの検出方法、腎予後の判定方法、腎機能障害診断マーカーの検出キット及び腎機能障害診断マーカー

肾功能障碍诊断标志物的检测方法、肾预后判定方法、肾功能障碍诊断标志物的检测试剂盒以及肾功能障碍诊断标志物

• 发表时间: 2022