白質脳症をきたす変異型TREX1によるDNA損傷毒性誘導機序とその抑制分子の解明

阐明引起白质脑病的突变体TREX1诱导DNA损伤毒性的机制及其抑制分子

• 批准号: 22K20882
• 负责人: 安藤 昭一朗
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20882/
• 关键词: 脳小血管病; RVCL; TREX1; DNA損傷; 細胞老化

本研究の目的は、Retinal vasculopathy with cerebral leukoencephalopathy（RVCL）疾患変異TREX1による細胞毒性を低減するヒト遺伝子種を同定することである。この背景には、RVCL疾患変異TREX1が、DNA切断損傷を誘導し、細胞毒性を引き起こすことがある。RVCLショウジョウバエモデルを用いた、RNAiスクリーニングで見出した、表現型抑制遺伝子4種のヒトホモログ遺伝子が、RVCLヒト細胞モデルにおいて細胞毒性を抑制し得るかを検討した。まず、HEK293細胞株を対象に、Flp-in systemを用いて、RVCL疾患変異であるp.Val235GlyfsTer6（V235fs）ヒトTREX1遺伝子を挿入し、RVCLヒト細胞モデルを作製した。このモデル細胞はドキシサイクリン誘導性に変異TREX1を発現する。次に、このモデル細胞に、表現型抑制候補遺伝子のshort hairpin RNA（shRNA）をレンチウイルスベクターを用いて導入した。shRNAによる遺伝子発現抑制効果は、droplet digital PCR（ddPCR）によって発現量解析を行った。いずれの遺伝子も発現抑制できていることを確認した。そして、このshRNAを導入したRVCLヒト細胞モデルを対象に、ToxiLight bioassayを用いて、表現型抑制候補遺伝子の抑制により、RVCL疾患変異TREX1による細胞毒性が低減するか検証した。結果、候補遺伝子4種のうち、2種の遺伝子において、ネガティブコントロールと比較して、shRNA導入群での細胞死率が低下した。従って、これらの2遺伝子が、ヒト細胞においてもRVCL疾患変異TREX1の細胞毒性を低減させる可能性が示唆された。

The purpose of this study is to determine the <s:1> cytotoxicity を of the disease variation of Retinal vasculopathy with cerebral leukoencephalopathy (RVCL) TREX1による, to reduce するヒト 伝 subspecies を, and to する する とである とである. こ の background に は, RVCL disorders - different TREX1 が, induction し を cut DNA damage, cell toxicity を led き up こ す こ と が あ る. RVCL シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ モ デ ル を with い た, RNAi ス ク リ ー ニ ン グ で shows し た, phenotype inhibition but 伝 four の ヒ ト ホ モ ロ グ heritage 伝 が, RVCL ヒ ト cells モ デ ル に お い て cytotoxicity を suppress し may る か を beg し 検 た. ま ず, HEK293 cell lines を に, Flp - system in seaborne を with い て, RVCL disorders - different で あ る p.V al235GlyfsTer6 (V235fs) ヒ ト TREX1 posthumous son 伝 を scions into し, RVCL ヒ ト cells モ デ ル を cropping し た. <s:1> モデ ドキシサ cells ドキシサ ドキシサ <s:1> リ リ リ リ に induced に changes TREX1を occur する. に, こ の モ デ に ル cells, phenotype suppression alternate heritage 伝 son の short hairpin RNA (shRNA) を レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い て import し た. The inhibitory effect of shRNAによる offspring 伝 occurrence is 伝, and the analysis of droplet digital PCR (ddPCR) によって occurrence amount is を row った. Youdaoplaceholder0 ずれ cultural heritage 伝 sub-伝 occurrence inhibition で て て る とを とを confirmation of た た. そ し て, こ の shRNA を import し た RVCL ヒ ト cells モ デ ル を に, seaborne ToxiLight bioassay を with い て, phenotype suppression alternate heritage 伝 son の inhibit に よ り, RVCL disorders - different TREX1 に よ る cytotoxicity が low cut す る か 検 card し た. Results, alternate but 伝 four の う ち, two の but 伝 に お い て, ネ ガ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル と compare し て, shRNA import group で の cell death rate low が し た. 従 っ て, こ れ ら の 2 heritage 伝 が, ヒ ト cells に お い て も RVCL disorders - different TREX1 の cytotoxicity を low cut さ せ が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Aberrant immunity caused by RVCL-mutant TREX1 depends on nuclear localization and enzyme activity

RVCL 突变体 TREX1 引起的异常免疫取决于核定位和酶活性

• 发表时间: 2022
• 作者: Kitahara Sho;Ando Shoichiro;Kato Taisuke;Nozaki Hiroaki;Kasahara Kyoko;Onodera Osamu
• 通讯作者: Onodera Osamu

Clinical characteristics of cerebral small vessel disease in pseudoxanthoma elasticum.

弹力纤维假黄瘤脑小血管病的临床特征

• 发表时间: 2022
• 作者: Ando Shoichiro;Uemura Masahiro;Kitahara Sho;Homma Yutaka;Aizawa Hitoshi;Iwanaga Akira;Murota Hiroyuki;Onodera Osamu
• 通讯作者: Onodera Osamu

The longitudinal evaluation of inflammatory cytokines expression in RVCL in vitro model.

RVCL 体外模型中炎症细胞因子表达的纵向评估。

• 发表时间: 2022
• 作者: Ando Shoichiro;Kato Taisuke;Nozaki Hiroaki;Kasahara Kyoko;Onodera Osamu
• 通讯作者: Onodera Osamu