ヒト臨床応用に向けたネフロンと腎間質も含めた腎臓再生法の確立

人体临床应用的肾单位和肾间质肾脏再生方法的建立

• 批准号: 22K20898
• 负责人: 齊藤 弥積
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20898/
• 关键词: 腎臓再生; 胎生臓器補完法; 腎間質; 前駆細胞; キメラ; iPS細胞

我々はヒトの腎前駆細胞を動物胎仔の腎臓（後腎）に移植し再生腎芽を作成し、動物の腎発生機構を移植した腎前駆細胞に働かせることで新規に腎臓を再生する胎生臓器補完法による腎再生法の臨床応用を目指している。動物胎仔の腎前駆細胞を除去し外来の前駆細胞と置換することで尿産生能を持つネフロンの再生に成功した。しかし、EPOやレニンなどの腎内分泌能を有する腎間質領域の再生が可能かは今まで不明確であったが、マウスの間質前駆細胞を別マウスの後腎に移植し、胎仔の腎発生機構により同種間で外来の腎間質前駆細胞が腎間質に分化できることを報告した。したがって、本研究では腎間質を含めた腎臓再生を行うため、ネフロン再生に成功した前駆細胞置換をネフロン前駆細胞と腎間質前駆細胞の両者に応用することで、ネフロンと腎間質の同時再生が可能かを検証することを目的とした。まず、ネフロンと腎間質前駆細胞を同時に除去できる遺伝子改変マウス（Six2/Foxd1-DTAマ ウス）の作成を試みた。Six2/Foxd1CreERT2マウスとLoxp-DTAマウスを交配し、その胎生13.5日齢の胎仔を得た。本胎仔の中にSix2/Foxd1-DTAマウス胎児が存在することを確認するためジェノタイピングを行った。さらにこの胎仔の後腎を採取し、タモキシフェンを付加した培養液を用いて器官培養を行い、ネフロン前駆細胞と間質前駆細胞に特異的な転写因子であるSix2とFoxd1に対する蛍光免疫染色を行った。その結果、胎仔の中にSix2/Foxd1-DTAマウスのジェノタイプ陽性のマウスを認め、蛍光免疫染色でSix2陽性ネフロン前駆細胞とFoxd1陽性間質前駆細胞の除去を確認できた。しかしながら、現時点では外部よりネフロン前駆細胞と腎間質前駆細胞の注入実験はできておらず、更なる検証が必要と考えられ、現在検証を行っている。

駆 before I 々 は ヒ ト の renal cell を animal tire tsai の is crucial renal (kidney) after し に transplant kidney bud regeneration を made し, animal の renal 発 institutions を transplantation し た 駆 before kidney cells に 働 か せ る こ と で new rules に renal viscera を regeneration す る viviparous viscera finish filling method に よ る kidney destruction の clinical 応 を refers し て い る. Animal tire tsai の 駆 before kidney cells before を remove し foreign の 駆 と replacement す る こ と で urine can produce を hold つ ネ フ ロ ン の regeneration に success し た. し か し, EPO や レ ニ ン な ど の renal endocrine can have す を る renal interstitial area の regeneration が may か は today ま で unclear で あ っ た が, マ ウ ス の 駆 before interstitial cell を don't マ ウ ス の after renal し に transplantation, seed の 発 raw institutions に よ り 駆 before same で between foreign の renal interstitial cells が renal interstitial に で き る こ と を report し た. し た が っ て, this study で は renal interstitial を containing め た renal viscera line regeneration を う た め, ネ フ ロ ン regeneration に successful し た 駆 cell replacement before を ネ フ ロ ン 駆 駆 before と renal interstitial cells before の struck the に 応 with す る こ と で, ネ フ ロ ン と renal interstitial の regeneration が may at the same time か を 検 card す る こ と を purpose と し た. ま ず, ネ フ ロ ン と を 駆 before renal interstitial cells at the same time に remove で き る heritage 伝 child change - マ ウ ス (Six2 / Foxd1 - DTA マ ウ ス) の made を try み た. Six2 / Foxd1CreERT2 マ ウ ス と Loxp - DTA マ ウ ス を し, mating そ の viviparous 13.5 day 齢 の tire tsai を た. This tire seed の に Six2 / Foxd1 - DTA マ ウ ス tire where exist が す る こ と を confirm す る た め ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ を line っ た. さ ら に こ の tire seed after の renal を take し, タ モ キ シ フ ェ ン を plus し を た broth with い て organ culture を い, ネ フ ロ ン と 駆 cells interstitial before 駆 cells に specific な planning write factor で あ る Six2 と Foxd1 に す seaborne る 蛍 light line immune dyeing を っ た. そ の results, tire seed の に Six2 / Foxd1 - DTA マ ウ ス の ジ ェ ノ タ イ プ positive の マ ウ ス を recognize め, 蛍 light immune dyeing で Six2 positive ネ フ ロ ン 駆 cells before と Foxd1 positive interstitial confirm の 駆 cells to remove を で き た. し か し な が ら, current で は external よ り ネ フ ロ ン 駆 駆 before と renal interstitial cells before の injection be 験 は で き て お ら ず, more な る 検 card が と necessary test え ら れ line, now 検 を っ て い る.