ヒト骨芽細胞の網羅的抗体ライブラリ作製と発現タンパクに基づく細胞分化の解明

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本研究ではヒト骨組織検体から分離した骨芽細胞を抗原としてラットを免疫し、抗体産生細胞を得てハイブリドーマを作製することが第一段階となっている。本年度は実験環境の立ち上げと試薬の購入を行い、倫理審査を経て提供された骨検体から骨芽細胞を分離した。しかし、骨から分離できた細胞はごく少数しかなく、完全培地においても生着し増殖する細胞は皆無であった。原因として考えられるのは①手術によって得た骨検体の質が悪い、②骨検体の保管を含めた取り扱いが悪い、③細胞分離の方法が悪いの3つと考えている。①は骨検体採取の対象となるのが変形性股関節症や変形性膝関節症といった高齢者に多い変性疾患であることで、骨芽細胞の数や質が悪い可能性を考えた。実際に採取した骨検体を固定、脱灰したうえで鏡検すると、マウスの検体と比較し単位面積当たりの細胞数が少ない傾向がみられた。②は手術の特性上、採取した骨組織は手術中に骨移植をする可能性があるため術野からすぐに下すことができず、採取してから細胞の分離を開始するまでに時間を要することがあげられる。この間は生食ガーゼなどで乾燥しないように注意しているが細胞レベルでは損傷が生じ、生存細胞数が少なくなっている一因になっていると考えている。また、人工膝関節手術では切除する骨組織が薄く、ボーンソーを用いることで熱による細胞損傷が起きている可能性がある。③については本研究ではマウスでの予備実験と同様のプロトコールでの細胞の分離を試みているが、ヒト検体に最適な方法の調整が必要であると考えている。研究成果は多くないが、来年度に向けての課題の明確化ができたことは最小限の成果であると考えている。