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ビフィズス菌による腸管上皮－T細胞間相互作用の制御に基づく腸炎抑制機構の解明

双歧杆菌控制肠上皮-T细胞相互作用阐明肠道炎症抑制机制

基本信息

批准号：
24880033
负责人：
宮内栄治
金额：
$ 1.91万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-08-31 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24880033/
关键词：
大腸炎

项目摘要

これまでの研究により、腸管上皮細胞に発現するCD40分子が、腸管上皮-T細胞間相互作用において重要な役割を果たし、大腸炎における炎症反応に加担していることを確認している。そこで、デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘導性大腸炎モデルマウスにおける腸管上皮CD40分子発現変化を、real-time PCR、免疫染色、およびWestern blottingで解析した。コンベンショナル環境下で飼育したマウスにおいては、DSS投与により大腸上皮におけるCD40発現が増加したが、SPFおよび無菌環境下で飼育したマウスではDSS投与により大腸炎発症は認められたものの、CD40発現の増加は認められなかった。このことから、腸管上皮CD40分子の発現増加には、ある種の腸内細菌、もしくは菌代謝物濃度が関与していることが示唆された。現在、コンベンショナルおよびSPF環境下で飼育したマウスの腸内細菌および代謝物濃度の解析を進めている。また、マウス腸管上皮様ptk6細胞を用いて上皮CD40分子の機能解析を行った。細胞をIFN-γで刺激後、CD40発現をreal-time PCRおよびWestern blottingで解析した結果、ptk6細胞においてCD40分子の発現増加が認められた。そこで、CD40発現増加したptk6細胞をCD40 agonist抗体で刺激し、腸管バリア機能の変化を評価した。その結果、CD40 agonist抗体の刺激により、経上皮電気抵抗値が有意に増加した。また、ZO-1, Occludin, Claudinsなどのtight junctionタンパク質の発現量および局在を解析した結果、CD40 agonist抗体刺激により、Claudin-4の局在が顕著に変化した。これらの結果から、上皮CD40はT細胞との相互作用だけでなく、腸管のバリア機能にも関与することが示唆された。

These studies confirm the importance of CD40 expression in intestinal epithelial cells, intestinal epithelial-T cell interactions, and inflammatory responses in colitis. CD40 molecular expression in intestinal epithelium, real-time PCR, immunostaining, and Western blotting analysis. In addition, the increase in CD40 production in large intestine epithelium caused by DSS administration was observed under sterile environment. The expression of CD40 molecule in intestinal epithelium increased, and the concentration of metabolites in intestinal bacteria increased. Now, the concentration of intestinal bacteria and metabolites in the culture medium under SPF environment is analyzed. The functional analysis of CD40 molecule in intestinal epithelium by PTK6 cells CD40 expression in PTK6 cells was detected by real-time PCR and Western blotting after IFN-γ stimulation The expression of CD40 increased in PTK6 cells, and CD40 agonist antibody stimulated the development of intestinal function. Results: CD40 agonist antibody stimulation was found to be significantly higher than normal. ZO-1, Occludin, Claudins, tight junction, high quality, high resolution, CD40 agonist antibody stimulation, Claudin-4, high resolution. These results indicate that epithelial CD40 is involved in T cell interaction and that intestinal function is related to T cell interaction.