分子イメージング技術を駆使した肺癌患者における分子標的薬耐性化判定系の開発

利用分子影像技术开发肺癌患者分子靶点耐药性测定系统

• 批准号: 24890295
• 负责人: 服部 久範
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: National Cancer Center Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890295/
• 关键词: 分子イメージング; 肺癌耐性; チロシンキナーゼ阻害薬; SPECT; アポトーシス

本研究では第一世代上皮性成長因子受容体（EGFR）-チロシンキナーゼ阻害薬（TKI）の耐性化を判定することが可能な分子プローブの開発を目的としている。本年度は耐性患者の約50%に見られるT790M変異を見極めるために第一世代、第二世代TKIの構造をベースにEGFRの結合能の異なる二種類の新規イメージング製剤（プローブA, B）の合成および評価を行ってきた。シグナル発生部位の核種は汎用性の高い99mTcを導入できるような錯体の分子設計を行い、順次、研究計画に基づき①ATP結合部位、②シグナル発生部位、③spacerのパートを合成した。さらに合成した標識前駆体から99mTcでの標識反応を検討し、80%以上の高い放射化学収率で標識することに成功した。そこで合成したプロ－ブA, BをT790M変異型耐性細胞株を用いて、in vitroにおけるそれぞれのプローブの細胞集積性を比較した。その結果、第二世代TKIの構造をベースにしたプローブBがプローブAよりも1.8倍高い集積を示した。この集積性の違いがEGFRの変異を認識しているのかを同様の細胞を用いて検証した。一般にTKIがEGFRに結合するとEGFR自己リン酸化を阻害し、細胞死を誘導することから、細胞増殖抑制試験およびwestern blotによる評価を行った。細胞増殖抑制試験では50 μMにおいてプローブBがほぼ100%の細胞増殖抑制効果を示したのに対し、プロ－ブAでは同濃度においてほとんど細胞増殖抑制効果を示さなかった。一方、western blotによる自己リン酸化阻害能の評価でもプローブBがプローブAよりも強い阻害活性を示すことが確認された。これらの結果により設計したプローブの変異受容体への結合能の違いを示すことができた。

This study aimed to determine the tolerance of first-generation epidermal growth factor receptor (EGFR)-receptor inhibitor (TKI) and to develop a possible molecular receptor. About 50% of the patients with T790M showed differences in the structure of TKI of the first and second generations, and differences in EGFR binding energy were observed in the synthesis and evaluation of TKI of the second generation. The molecular design of the complex was carried out in the sequence of introduction of 99mTc into the complex, and the synthesis of ATP binding sites, 99mTc binding sites, and spacer binding sites was carried out in the research plan. The synthesis of the precursor of the marker from 99mTc to 99mTc was successful, with a high radiochemical yield of more than 80%. A comparison of cell aggregation of heterotypic resistant cell lines T790M in vitro and in vitro As A result, the structure of the second generation TKI is 1.8 times higher than that of the first generation. The aggregation of EGFR and its variation is recognized in the study of EGFR and its variation in the study of EGFR and its variation in the study of EGFR. TKI binding to EGFR, EGFR self-acidification, cell death induction, cell proliferation inhibition, and Western blot evaluation Cell growth inhibition test: 50 μM of the cell growth inhibition effect, 100% of the cell growth inhibition effect, the same concentration of the cell growth inhibition effect. A western blot was used to evaluate the acid resistance of the enzyme. The result is that the binding energy of the receptor can be demonstrated by the design.

项目成果

分子標的薬耐性化の判定を目指した新規SPECTプローブの開発

开发一种新的 SPECT 探针，旨在确定对分子靶向药物的耐药性

• 发表时间: 2013
• 作者: 石峯康浩;和田耕治;河野健一;服部久範
• 通讯作者: 服部久範