脂肪幹細胞を用いた骨芽細胞シートの開発研究

利用脂肪干细胞研究和开发成骨细胞片

基本信息

  • 批准号:
    26893160
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.92万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
  • 财政年份:
    2014
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2014-08-29 至 2015-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究は脂肪由来幹細胞(ASC)を用いた骨芽細胞シートの作成を目的として行われた。脂肪幹細胞は骨髄由来幹細胞と比較し採取が容易なことから、現在細胞の供給源として注目されている。本研究ではASCはICRマウスの背部皮下組織から採取した脂肪組織をコラゲナーゼ処理を行い脂肪細胞を分離した。これを75cm2培養用フラスコにて大量培養した(D-Mem,100mg/ml Penicillin-Streptomycin)。さらにASCをAscorbic Acid,Hydrocortisone,β‐Glycerophosphateを添加した骨誘導培地にて培養し骨芽細胞へ分化誘導を行った。この手法にて骨誘導を行ったASCの骨芽細胞マーカーは細胞上清をELISA法にて計測し、アルカリフォスファターゼおよびOsteocalcinの活性にて確認した。こうして分離したASCを移植するための基剤には同種(ICRマウス)より採血し、分画したトロンビンおよびフィブリノーゲンから精製したフィブリンシートに着目した。マウス血液から作成したフィブリンシートは精製後に物性試験を行った。無血清培地での耐性試験では約1週間程度形状維持されていたが10日目以降萎縮し約14日程度で吸収され消失した。フィブリンシートの生成実験後に骨芽細胞シートの生成実験を行った。トロンビンおよびフィブリノーゲンはガラス製シャーレ内で反応させ、同時に骨分化を行ったASCを混和させた。その後CO2インキュベーターで24時間培養し、培養後位相差顕微鏡にて細胞内でのASCの定着を確認した。H26年度の研究実績としては骨芽細胞シートの生成実験までを主体として行われた。以後の研究内容としては生成した骨芽細胞シートの移植実験を計画している。
In this study, the origin of fat (ASC) was used to make the purpose of this study. The origin of the fat cell bone is that it is easier to pick up the fat cell than to pick it up, and now the cell is for the source to pay attention to. In this study, the subcutaneous tissue of the back of ASC ICR was collected and the adipose tissue was isolated. Please use the word "75cm2" to train people in large quantities (Dmurm meme 100mg Penicillin-Streptomycin). ASC Ascorbic Acid,Hydrocortisone and β-Glycerophosphate were added to guide the differentiation of bone buds. ASC, bone bud, bone bud, In this way, we need to separate the data from the ASC transplant system. We need to use the same kind of (ICR) blood test, separate drawings, and make sure that we need to pay attention to each other. After the blood is made into the essence, the physical properties of the blood are not fine. The serum-free endurance test showed that the shape was maintained for 10 days in order to reduce the temperature for about 14 days. After the formation of bone buds, the cells of bone buds were formed. In the meantime, bone differentiation was performed at the same time, and ASC was mixed in the same time. After that, the CO2 was tested after 24 hours of incubation, and the difference between the two was measured by the micrometer. The intracellular concentration of ASC was confirmed. In the year H26, there was a study on the generation of bone bud cells. In the future, the content of the study was to generate bone buds, bone buds and bone buds.

项目成果

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