微小血管病態に基づく家族性アミロイドポリニューロパチーの新規治療法の探索

基于微血管病理学寻找家族性淀粉样多发性神经病治疗新方法

• 批准号: 26893170
• 负责人: 前田 敏彦
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-08-29 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26893170/
• 关键词: 血液脳関門; 末梢神経障害; 家族性アミロイドポリニューロパチー

本研究では，家族性アミロイドポリニューロパチー（FAP）における末梢神経の微小血管障害の病態を細胞学的に明らかにすることを目的として，我々が樹立したヒト末梢神経由来内皮細胞株と周皮細胞株による血液神経関門（in vitro BNB）モデルを用いて，transthyretin（TTR） 蛋白を輸送・排泄する分子機構の解明　と　変異型TTR 蛋白による血液神経関門（BNB）破綻の分子メカニズムについての解析を行った．TTR に対する受容体の１つとして後期糖化反応生成物受容体（receptor of advanced glycation-end product：RAGE）が想定されているが，今回，定量的RT-PCRとwestern blot法による検討で，ヒト末梢神経由来内皮細胞株や周皮細胞株にRAGEの遺伝子・蛋白が認められ，変異型TTR（recombinant V30M TTR）を細胞株に作用させることで，RAGEの遺伝子発現および蛋白レベルの増加が確認された．また，recombinant V30M TTR の作用により細胞株のROS活性の亢進が認められ，野生型TTRを作用させた場合に比べ，V30M TTR を作用させた際にin vitro BNBのバリア機能を示す電気抵抗値が有意に低下した．これまでの結果から，変異型TTRは直接的に微小血管を障害し，病態として酸化ストレス活性化を介する機序が示唆された．一方，TTRに対する新たな受容体分子や輸送・排泄分子を発見することを目的として，野生型TTR蛋白質を一定時間作用させた微小血管内皮細胞株の全細胞抽出液を用いて共免疫沈降法による探索を行ったが，新たな分子の同定には至らなかった．

In this study, we established a family of FAP (FAP)-derived endothelial cell lines and pericardial cell lines for the development of pathophysiological cytology of microvascular disorders in the peripheral nervous system (in vitro BNB) protein transport and excretion molecular mechanism analysis of TTR protein in vitro BNB molecular mechanism analysis of TTR protein in vitro BNB protein in vitro BNB protein in vitro （receptor of advanced glycation-end product： This paper reports quantitative RT-PCR and western blot analysis of RAGE protein in peripheral nervous system derived from endothelial and pericardial cell lines.(recombinant V30M TTR) was used in the cell line. At this time, RAGE gene expression and protein expression were confirmed. In addition, the recombinant V30M TTR was found to increase ROS activity in cell lines, while the wild-type TTR was found to decrease electrical resistance in vitro BNB when V30M TTR was found to act. As a result, different TTRs are directly responsible for microvascular damage, and the mechanisms involved in their activation are demonstrated. A novel TTR protein was identified by immunoprecipitation in whole cell extracts of microvascular endothelial cell lines.