New Technique for Producing Hybridoma and Gene Transfection Using Laser Iradiation

利用激光照射生产杂交瘤和基因转染的新技术

基本信息

  • 批准号:
    10557107
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 7.87万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B).
  • 财政年份:
    1998
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1998 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Cell fusion by laser radiation : We developed a new method for inducing cell fusion under microscope using a microprocessing laser device. The target cells were irradiated with laser beams for trapping and trapped cells were placed in contact with the cells fixed by laser beam. The pulse laser beams are focused on the contact surface. The fusion rate of mouse myeloma cells was 38%. Rate of hybridoma production of myeloma cell and lymphocyte was 2%. We confirmed its proliferation and the production of IgG.This method is characterized by production of hybtidomas of target cells, lower cell toxicity and a high rate of hybrid production.Gene transfection by laser radiation : We developed the transfection system using laser beams. The principle of transfection by laser is that a small hole is made in the cell membrane by pulse laser irradiation and genes containing in the culture medium is transferred into the cytoplasm. We transfected plasmids encoding enhanced green fluorescent protein and neomycin phosphotransferase, and detected the its expression. The transfection rate was approximately 10%. In this method we established the transformed cell line. This method didn't need any virus nor specific vector and enables us to transfect gene to targeted cells.
通过激光辐射的细胞融合:我们开发了一种使用微加工激光装置在显微镜下诱导细胞融合的新方法。用激光束照射靶细胞以捕获,并将捕获的细胞与用激光束固定的细胞接触。脉冲激光束聚焦在接触表面上。小鼠骨髓瘤细胞融合率为38%。骨髓瘤细胞和淋巴细胞杂交瘤的产生率为2%。我们证实了它的增殖和IgG的产生。这种方法的特点是产生靶细胞的杂交瘤,细胞毒性低,杂交生产率高。激光辐射基因转染:我们开发了使用激光束的转染系统。激光转染的原理是利用脉冲激光照射在细胞膜上打一个小孔,将培养基中含有的基因转移到细胞质中。将编码增强型绿色荧光蛋白和新霉素磷酸转移酶的质粒转染到大肠杆菌中,检测其表达。转染率约为10%。在这种方法中,我们建立了转化细胞系。该方法不需要任何病毒或特异性载体,使我们能够将基因导入靶细胞。

项目成果

期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Y Shirahata, et al: "New technique for gene transfection using laser iradiation"Journal of Investigative Medicine. 4月号(in press). (2001)
Y Shirahata 等人:“利用激光照射进行基因转染的新技术”,《研究医学杂志》4 月号(2001 年出版)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Ohkohchi N, et al: "New technique for producing hybridoma using laser radiation"Laser in Surgery and Medicine. 27. 262-268 (2000)
Ohkohchi N 等人:“使用激光辐射产生杂交瘤的新技术”激光在外科和医学中的应用。
  • DOI:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Ohkohchi N, et al: "New technique for producing hybridoma using laser radiation."Laser in surgery and Medicine. 27. 262-268 (2000)
Ohkohchi N 等人:“利用激光辐射产生杂交瘤的新技术。”激光在外科和医学中的应用。
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  • 通讯作者:
Ohkohchi N, et al.: "New technique for producing hybridoma using laser ladiution."Laser in Surgery and Medicine. 27. 262-268 (2000)
Ohkohchi N 等人:“使用激光照射产生杂交瘤的新技术。”激光在外科和医学中的应用。
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  • 作者:
  • 通讯作者:
Y.Shirahata, et al: "New technique for gene eransfection using laser iradiation"Journal of Inveseigative Medicine. in prese. (2001)
Y.Shirahata 等人:“使用激光照射进行基因擦除的新技术”调查医学杂志。
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