シナプスにおけるエンドサイトーシス機能タンパク-膜リン脂質相互作用の解析

突触内吞功能蛋白-膜磷脂相互作用的分析

• 批准号: 14380306
• 负责人: 絹田 正裕
• 金额: $ 6.85万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14380306/
• 关键词: エンドサイトーシス; 小胞輸送; 無細胞系; アンフィファシジン; リポソーム; ダイナミン; シナプス小胞; アンフィフィジン; 膜リン脂質; ARF6; Cdk5; p35; アンフィファイジン; 動的光散乱法; Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate; ADP-ribosylation factor; Cyclin-dependent kinase 5

Amphiphysin 1によるDynamin GTPase活性の上昇Dynamin 1GTPアーゼ活性に対するAmphiphysin 1と膜脂質の影響を調べ、Amphiphysin 1が、大型リポゾームの存在下にDynamin 1のGTPアーゼ活性を上昇することを明らかにした。リポゾームにフォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトール2リン酸などの酸性リン脂質を含まれる場合、特にGTPアーゼ活性の増強効果が高かった。ミュータントAmphiphysin 1を用いた解析により、Dynamin 1GTPアーゼ活性の増強には膜脂質への結合を担うBARドメインと、dynaminとの結合ドメインであるSH3ドメインが必要でであることを明らかにした。また、クラスリン結合部位、AP2結合部位を含む中間部は、Dynamin 1GTPアーゼ活性に対して抑制的に働くことが示唆された。Amphiphysin 1によるDynamin 1と膜脂質の結合の増加リポゾームを用いた結合実験により、Amphiphysin 1がDynamin 1と膜脂質の結合を増加させることを明らかにした。この結合増加の一因は、Amphiphysin 1のBARドメインとSH3ドメインを介した間接的結合によるものであることを、ミュータントAmphiphysin 1を用いた解析により明らかにした。Amphiphysin 1とDynamin 1と脂質膜の結合増加ミュータントAmphiphysin 1を用いた解析により,Amphiphysin 1とDynamin 1のリング形成にはBARドメインとSH3ドメインが必要であることを明らかにした。また、リング形成とDynamin 1 GTPアーゼ活性の上昇が、Dynamin 1と膜結合性にある程度相関することを示唆した。以上の成果を論文にまとめ発表した。

In the presence of Amphiphysin 1 Dynamin GTPase activity, Dynamin 1 GTP activity, Dynamin 1 GTP activity, membrane lipids, Dynamin 1, GTP activity, membrane lipids, membrane lipids, lipids and lipids. In the first place, the concentration of acid, acid, fat, acid, GTP, acid, fat, acid, fat, acid, acid, lipid, acid, acid, lipid, acid, acid, lipid, In this paper, Amphiphysin 1 was used to analyze the temperature, Dynamin 1GTP activity, membrane lipid concentration, BAR temperature, SH3 temperature, and so on. The joint site of Dynamin 1GTP, the joint site of Dynamin 1GTP and the junction site of Dynamin 1GTP showed that there was no significant difference between the two groups. The combination of Amphiphysin 1 and Amphiphysin 1 Dynamin 1 membrane lipids and Amphiphysin 1 Dynamin 1 membrane lipids was used to detect the changes of membrane lipid concentration. The combination of one reason and one reason, Amphiphysin 1, BAR, SH3, and so on, the combination of the connection, the connection, the Amphiphysin, the connection, the connection. The combination of Amphiphysin 1 Dynamin 1 fat membrane and Amphiphysin 1 Dynamin 1 fat membrane was used to analyze the data, and the Amphiphysin 1 Dynamin 1 lipid membrane was used to analyze the structure of the membrane. The formation of Dynamin-1 GTP and Dynamin-1 membrane binding activity showed that the degree of adhesion was different. The above results are listed in the table.

项目成果

絹田正裕: "神経シナプスにおけるエンドサイトーシス機能タンパク質-膜リン脂質相互作用機序の人工脂質膜を用いた解析法"岡山医学会雑誌(総説). 116・1(印刷中). (2004)

Masahiro Kinuta：“使用人工脂质膜分析神经突触中的内吞功能蛋白质-膜磷脂相互作用机制”冈山医学会杂志（评论）116・1（出版中）。

Krauss M., Kinuta M.et al.: "ARF6 stimulates clathrin/AP-2 recruitment to synaptic membranes by activating phosphatidylinositol phosphate kinase type Iγ"J. Cell Biol.. (in press). (2003)

Krauss M.、Kinuta M.等人：“ARF6 通过激活 Iγ 型磷脂酰肌醇磷酸激酶刺激网格蛋白/AP-2 募集到突触膜”J. Cell Biol.（出版中）。

Tomizawa et al.: "Cophosphorylation of amphiphysin 1 and dynamin 1 by Cdk5 regulates clathrin-mediated endocytosis of synaptic vesicles"Journal of Cell Biology. 163・4. 813-824 (2003)

Tomizawa 等：“Cdk5 对两性蛋白 1 和动力蛋白 1 的共磷酸化调节网格蛋白介导的突触小泡内吞作用”《细胞生物学杂志》163·4 (2003)。

Kinuta M., Takei K.: "Utilization of liposomes in vesicular transport studies. Review"Cell Struc. Funct.. 27・2. 63-69 (2002)

Kinuta M.，Takei K.：“脂质体在囊泡运输研究中的利用。综述”Cell Struc.. 27・2（2002）。

Yoshida Y, Kinuta M et al.: "Stimulatory effect of amphiphysin an dynamin-dependent vesicle formation and effect of bilayer cuvature on amphiphysin function"Nature Cell Biology. (In submittion).

Yoshida Y、Kinuta M 等人：“两性蛋白对动力依赖性囊泡形成的刺激作用以及双层结构对两性蛋白功能的影响”《自然细胞生物学》。