MOLECULAR AND CELL-BIOLOGICAL ANALYSIS OF VACUOLAR FUNCTION IN FILAMENTOUS FUNGI

丝状真菌液泡功能的分子和细胞生物学分析

基本信息

  • 批准号:
    15380058
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 9.98万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    2003
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2003 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Vacuoles play very important roles in pH and osmotic regulation, protein degradation and strage of amino acids, small ions as well as polyphosphate in yeast S.cerevisiae. Although it is known that vacuoles in filamentous fungi are highly pleiomorphic and some of them, e.g. tubular vauoles, are implicated in intra-and intercellular transport, little is known about vacuolar functions and morphology dynamics at the molecular level. In this research project I have carried out elucidation of vacuolar function at the molecular and cell-biological level. One of Koji mold A.oryzae vps (Vacular Protein Missorting) mutants, which had been isolated previously, was transformed with cosmid genome library. And the DNA fragment complement the vps mutation was successfully isolated and designated it Aodnf3 due to its homology with yeast DNF3 gene. Next I isolated two genes Aovps10 and Aovam3 from A.oryzae. Expression of EGFP fusion of Aovps10 gene in A.oryzae showed that fluorescence was observed in vacuoles and prevacuolar compartments. In a strain expressing EGFP-Aovam3 fusion, dynamics of vacuolar membranes was clearly observed by confocal laser microscopy. This system enabled to observe vacuole morphology including large spherical vacuoles, tubular vacuoles, and putative prevacuolar compartments at higher resolution level in living cells.
在酵母菌中,多酚在pH和渗透压调节、蛋白质降解、氨基酸、小离子和多聚磷酸盐的迁移等方面起着重要作用。虽然已知丝状真菌中的液泡是高度多形的,并且其中的一些,例如管状液泡,涉及细胞内和细胞间的运输,但在分子水平上对液泡的功能和形态动力学知之甚少。在这个研究项目中,我在分子和细胞生物学水平上对液泡功能进行了阐明。利用粘粒基因组文库转化了之前分离的一种曲霉米曲霉vps(Vacular Protein Missorting)突变体。成功分离到与vps突变互补的DNA片段,并将其命名为Aodnf 3。接下来,我从A. oryzae中分离了两个基因Aovps 10和Aovam 3。Aovps 10基因的EGFP融合蛋白在拟南芥中的表达结果表明,在液泡和液泡前区室中观察到荧光。在表达EGFP-Aovam 3融合的菌株中,通过共聚焦激光显微镜清楚地观察到液泡膜的动态。该系统能够以更高的分辨率观察活细胞中的液泡形态,包括大的球形液泡、管状液泡和推定的前液泡区室。

项目成果

期刊论文数量(38)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
分子麹菌学
分子曲模科学
  • DOI:
  • 发表时间:
    2003
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Wada O;Oishi H;Takada I;Yanagisawa J;Yano T;Kato S;北本勝ひこ(編著)
  • 通讯作者:
    北本勝ひこ(編著)
J.Maruyama, H.Nakajima, K.Kitamoto: "Novel role of cytoplasmic dynein motor in maintenance of the nuclear number in conidia through organized conidiation in Aspergillus oryzae."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 307. 900-906 (2003)
J.Maruyama、H.Nakajima、K.Kitamoto:“细胞质动力蛋白马达在米曲霉中通过有组织的分生孢子形成维持分生孢子核数量的新作用。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 307. 900-906(
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
FJ.Jin, J.Maruyama, PR Juvvadi, M.Arioka, K.Kitamoto: "Adenine auxotrophic mutants of Aspergillus oryzae : development of a novel transformation system with triple auxotrophic hosts Isolation of adenine auxotrophic mutants from A.oryzae"Biosci.Biotechnol.
FJ.Jin、J.Maruyama、PR Juvvadi、M.Arioka、K.Kitamoto:“米曲霉的腺嘌呤营养缺陷型突变体:开发具有三重营养缺陷型宿主的新型转化系统从米曲霉中分离腺嘌呤营养缺陷型突变体”Biosci.Biotechnol
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
K.Masai, J.Maruyama, H.Nakajima, K.Kitamoto: "In vivo visualization of the distribution of a secretory protein in Aspergillus oryzae hyphae using the RntA-EGFP fusion protein"Biosci.Biotech.Biochem.. 67. 455-459 (2003)
K.Masai、J.Maruyama、H.Nakajima、K.Kitamoto:“使用 RntA-EGFP 融合蛋白对米曲霉菌丝中分泌蛋白的分布进行体内可视化”Biosci.Biotech.Biochem.. 67. 455-
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
M.Oka, J.Maruyama, M.Arioka, H.Nakajima, K.Kitamoto: "Molecular cloning and functional characterization of avaB, a gene encoding Vam6p/Vps39p-like protein in Aspergillus nidulans."FEMS Microbiol.Letters. (in press). (2004)
M.Oka、J.Maruyama、M.Arioka、H.Nakajima、K.Kitamoto:“avaB 的分子克隆和功能表征,avaB 是构巢曲霉中编码 Vam6p/Vps39p 样蛋白的基因。”FEMS Microbiol.Letters。
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  • 通讯作者:
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