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Analysis of intracellular translocation of choline acetyltransferase by bioimaging

通过生物成像分析胆碱乙酰转移酶的细胞内易位

基本信息

批准号：
15500257
负责人：
MATSUO Akinori
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15500257/
关键词：
pChAT cChAT GFP translocation HEK293 PC12 bChAT トランスロケーションリン酸化

项目摘要

Choline acetyltransferase(ChAT), the synthesizing enzyme for acetylcholine, has been implicated to involve multiple isoforms of ChAT mRNA in several animals. Since these isoforms are mostly non-coding splice variants, only a homologous ChAT protein of about 68 kDa has been shown to be produced in vivo. Recent evidence indicates the existence of a protein coding splice variant of ChAT mRNA, which lacks exons 6-9 of the rat ChAT gene. The encoded protein was designated ChAT of a peripheral type(pChAT), because of its preferential expression in the peripheral nervous system as confirmed by Western blot and immunohistochemistry. However, functional significance of pChAT is unknown. To obtain a clue to this question, we examined a possible difference in intracellular trafficking between pChAT and the well-known ChAT of the common type(cChAT) using green fluorescent protein(GFP) in living human embryonic kidney cells (HEK293 cells) and PC-12 cells. Confocal laser scanning microscopy revealed that pChAT-GFP was detectable in the cytoplasm but not in the nucleus, whereas cChAT-GFP was found in both cytoplasm and nucleus. Following treatment with leptomycin B, a nuclear export pathway inhibitor, pChAT-GFP became detectable in both cytoplasm and nucleus, indicating that pChAT can be translocated to the nucleus. In contrast, the leptomycin B treatment did not seem to affect the content of intranuclear cChAT-GFP. After incubation with protein kinase C inhibitors, enhanced accumulation of pChAT-GFP but not cChAT-GFP occurred in the nucleus. These results clearly indicate that pChAT varies from cChAT in intracellular transportation, probably reflecting the difference in physiological roles between pChAT and cChAT.

胆碱乙酰转移酶 (ChAT) 是乙酰胆碱的合成酶，在多种动物中涉及多种 ChAT mRNA 亚型。由于这些亚型大多是非编码剪接变体，因此仅显示约 68 kDa 的同源 ChAT 蛋白在体内产生。最近的证据表明存在 ChAT mRNA 的蛋白质编码剪接变体，该变体缺乏大鼠 ChAT 基因的外显子 6-9。所编码的蛋白被命名为外周型 ChAT（pChAT），因为蛋白质印迹和免疫组织化学证实其在外周神经系统中优先表达。然而，pChAT 的功能意义尚不清楚。为了找到这个问题的线索，我们在活人胚胎肾细胞（HEK293 细胞）和 PC-12 细胞中使用绿色荧光蛋白（GFP）检查了 pChAT 和众所周知的常见类型 ChAT（cChAT）之间的细胞内运输可能存在的差异。共聚焦激光扫描显微镜显示，pChAT-GFP 在细胞质中可检测到，但在细胞核中未检测到，而 cChAT-GFP 在细胞质和细胞核中均被发现。用核输出途径抑制剂瘦霉素 B 处理后，pChAT-GFP 在细胞质和细胞核中均可检测到，表明 pChAT 可以转位至细胞核。相反，细霉素B处理似乎不影响核内cChAT-GFP的含量。与蛋白激酶 C 抑制剂一起孵育后，细胞核中 pChAT-GFP 的积累增加，但 cChAT-GFP 的积累没有增加。这些结果清楚地表明，pChAT 与 cChAT 在细胞内运输方面有所不同，可能反映了 pChAT 和 cChAT 之间生理作用的差异。

项目成果

期刊论文数量（35）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Iwami I, Tooyama I, Kinoshita A, Matsuo A., Oomura Y., Sasaki K., Kimura H.: "Demonstration of fibloblast growth factor-1 in rat adreanal gland as revealed by reverse transcription-polymerase chain reaction and immunohistochemistry"Acta Histochemistry and

Iwami I、Tooyama I、Kinoshita A、Matsuo A.、Oomura Y.、Sasaki K.、Kimura H.：“通过逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学揭示大鼠肾上腺成纤维细胞生长因子-1 的演示”学报

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Saito N.: "Fluorescent imaging of Protein kinase C Translocation. In "Protein kinase C Protocols""edited by Newton A.C. Humana Press. 12 (2003)

Saito N.：“蛋白激酶 C 易位的荧光成像。在“蛋白激酶 C 方案”中”，Newton A.C. Humana Press 编辑。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Fredholm B.B, Assender J.W., Irenius E, Kodama N, Saito N.: "Synergistic effects of adenosineA1 and P2Y receptor stimulation on calcium mobilization and PKC translocation in DDT1 MF-2 cells"Cellular and Molecular Neurobiology. 23・3. 379-400 (2003)

Fredholm B.B、Assender J.W.、Irenius E、Kodama N、Saito N.：“腺苷 A1 和 P2Y 受体刺激对 DDT1 MF-2 细胞中钙动员和 PKC 易位的协同作用”细胞和分子神经生物学 23・3。 (2003)

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Sasaki A, Taketomi T, Kato R, Saeki K, Nonami A, Sasaki M, Kuriyama M, Saito N, Shibuya M, Yoshimura A.: "Mammalian Sprouty4 suppresses Ras-independent ERK activation by binding to Raf1"Nature Cell Biology. 5・5. 427-432 (2003)

Sasaki A、Taketomi T、Kato R、Saeki K、Nonami A、Sasaki M、Kuriyama M、Saito N、Shibuya M、Yoshimura A.：“哺乳动物 Sprouty4 通过与 Raf1 结合抑制 Ras 独立的 ERK 激活”《自然细胞生物学》5。・5。427-432（2003）